グリーニング病根絶事業を支援する高精度診断・最小薬剤使用・統計的手法の開発

• 課題番号: 2011018201
• 研究期間: 2011-2013
• 年度: 2011
• 摘要: （１）カンキツグリーニング病罹病葉（研究所保有）から回収した高密度の病原細菌菌液をサンプルとして、さまざまな培地での培養を試験する。培地については、公開されている本病原細菌のゲノム情報をもとに、本菌単独では合成できないと予測される種々栄養素、特にアミノ酸成分に着目して、各成分を配合して組成を検討する。菌の培養の可否については、培地の表面成分（コロニーを含む）をサンプルとしてコロニーPCRを行い、陽性、陰性の結果で判断する。（２）茎頂培養により作出した無病幼苗（樹高10～15 cm）に対し、接種位置を明らかにし、虫媒による病原細菌接種を行う。接種１～７日後、10、20日後並びに１ヶ月後から６ヶ月後まで毎月、供試苗を分解し、LAMP法およびリアルタイムPCR法を用いて検定に供する。検定は地下部を含め、垂直方向に３ cm刻みで実施し、接種からの病原細菌の経時的動態を明らかにする。（３）我々が見出したSSRマーカーを中心に、海外で報告のあるSSRマーカーについても利用の可能性について検討する。これらSSRマーカーを利用する際のPCR反応条件についても検討する。カンキツグリーニング病が発生している地域からミカンキジラミを採集し、個体ごとにゲノムDNA抽出を行う。各地域でどのSSRマーカーを用いれば多型が得られるかマーカーの選抜を行うとともに、フラグメント解析の条件についても検討する（４）検査反応において、温度調整可能な家庭用電化製品を用い、有効性を検討する。ガラス繊維濾紙を用いたカンキツグリーニング細菌DNAの簡易迅速抽出法（玉野井ら2010）や、プラムポックスウイルス検定キット（(株)ニッポン・ジーン）のウイルス検出法を参考に、現地発生地域から採集したサンプルを用い、既存の簡易DNA抽出法と同等の抽出精度のある簡易迅速抽出法を検討する
• カテゴリ: 薬剤 その他のかんきつ