馬伝染性子宮炎のＤＮＡ診断に関する基礎的研究

• 課題番号: 1992003480
• 研究機関名: 家畜衛生試験場（家畜衛試）
• 研究分担: 研一・細菌１研細菌２研
• 研究期間: 新Ｈ０３～Ｈ０５
• 年度: 1992
• 摘要: 本年度は，馬伝染性子宮炎菌（Ｔａｙｌｏｒｅｌｌａｅｑｕｉｇｅｎｉｔａｌｉｓ）の遺伝子ライブラリ－作製を試みた。供試したＤＮＡは，チョコレ－ト寒天培地上に発育した本菌より，フェノ－ル抽出法とエタノ－ル沈澱法によって精製した。精製ＤＮＡ約１０μｇを制限酵素Ｓａｕ３ＡＩによって不完全消化した後，蔗糖密度勾配超遠心によって，ＤＮＡ断片長の違いにより分画した。このうち，長さ約０．３ｋｂ～１．５ｋｂの断片を含む分画より，ＤＮＡ断片を精製回収した。ライブラリ－作製用のベクタ－としては，ｐＵＣ１１９を用い，これを制限酵素ＢａｍＨＩとアルカリフォスファタ－ゼで処理したものを，用意した。ベクタ－と上述のＤＮＡ断片を，Ｔ４ＤＮＡリガ－ゼで連結した後，大腸菌ＨＢ１０１株を形質転換したところ，一回の操作で約５００個のクロ－ンを得ることができた。そのうち１６個について，微量簡便法によりプラスミドＤＮＡを抽出し，制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄ■により消化し，挿入断片の長さを検索したところ，それぞれ約０．３ｋｂ～１．２ｋｂの断片を含むクロ－ンであることが確認された。
• カテゴリ: 病害虫 馬 治療技術 防除