ジェミニウイルスの単離・同定及び利用（１２６）

• 課題番号: 1993000412
• 研究機関名: 農業生物資源研究所（生物研）
• 研究分担: 分子育種・形質転換研
• 研究期間: 継Ｈ０２～Ｈ０６
• 年度: 1993
• 摘要: オギ条斑ウイルス（ＭｉＳＶ）は日本で発見された唯一のイネ科植物に感染するジェミニウイルスである。ＭｉＳＶをイネ科植物体内で複製できるようにベクター化し、外来遺伝子（ＣＡＴ）の高率発現及びＤＮＡの複製が必要とされるトウモロコシ由来のトランスポゾン（Ａｃ／Ｄｓ）の切り出しの検出を明らかにした。同トランスポゾン内部にマーカー遺伝子（ＨＰＴ）を挿入し（Ｄｓ：：ＨＰＴ）、ジェミニベクターから直接イネゲノム内に転移する可能性を検討した。Ｄｓ：：ＨＰＴが複製できる状態でＡｃ転移酵素を発現させた結果、独立した１６のハイグロマイシン抵抗性カルスを得た。全てのカルスにハイグロマイシン抵抗性遺伝子の存在することがサザンハイブリダイゼーション分析により示された。ジェミニベクター部分をプローブとしたサザンハイブリダイゼーションではこのうち５個体でベクター部分の存在しないことが判明した。Ｉｎｖｅｒｔｅｄ ＰＣＲを行いＤｓＨｙｇ近傍の塩基配列を調べた結果、この５個体全てでＴａｒｇｅｔ ｓｉｔｅ ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎが見られた。この結果Ａｃ転移酵素の働きでジェミニウイルスベクターから切り出されたＤｓＨｙｇが直接イネゲノム内に転移したことが明かとなった。ゲノム内での転移において近傍にしか転移しないと考えられているＡｃ／Ｄｓがジェミニウイルスベクターという染色体外因子から転移が示されたことは最初の知見である。
• カテゴリ: 育種 抵抗性 抵抗性遺伝子 とうもろこし