ｍＲＮＡ利用プローブ等による植物ウイルスの高感度検出手法の開発（２２４）

• 課題番号: 1993000516
• 研究機関名: 農業生物資源研究所（生物研）
• 研究分担: 企画調整分子育種・ゲノム研遺子構造研
• 研究期間: 完Ｈ０２～Ｈ０４
• 年度: 1993
• 摘要: イネ縞葉枯ウイルスの外被蛋白質遺伝子を導入した形質転換イネのＴ２世代２２系統の各個体の葉片よりＣＴＡＢ法でＤＮＡを調製し、Ｐｓｔ Ｉで消化後、Ｍｕｐｉｄ超小型電気泳動システムで約１時間泳動し、Ｈｙｂｏｎｄ－Ｎ－ｐｌｕｓメンブレンにトランスファーした。サザン分析用のプローブは、イネ形質転換用プラスミド構築に用いたプラスミドよりイネ縞葉枯ウイルス外被蛋白質遺伝子部分をＰｓｔＩで切り出し精製して用いた。非放射性検出法としてＥＣＬ遺伝子検出システム（アマシャム）を使用した。プレハイブリダイゼーションの後にＤＮＡ標識試薬と混合したプローブでハイブリダイゼーションを行った。洗浄の後に検出試薬と反応させ、ＤＮＡ結合面をＥＣＬ用ハイパーフィルム（アマシャム）と密着させて露光させた。この方法により、多数の形質転換植物体のゲノムＤＮＡ中の挿入遺伝子を、非放射性プローブで簡便、迅速且つ高感度に検出することが可能となった。
• カテゴリ: あま 植物ウイルス