放射性ＤＮＡプローブを用いたハダカムギ貯蔵蛋白質関与遺伝子の解析手法の開発（４９）

• 課題番号: 1993002816
• 研究機関名: 四国農業試験場（四国農試）
• 研究分担: 作物開発・育種工学研
• 研究期間: 完Ｈ０２～Ｈ０４
• 年度: 1993
• 摘要: ハダカムギ系統四Ｒ系９１１の高蛋白性の解析を行うために、貯蔵タンパク質ホルデインの構造遺伝子の解析手法の開発を目的とした。その未熟種子から抽出したポリＡ＋ＲＮＡを鋳型にして、ポリメラーゼ連鎖反応を利用してＢ１ホルデインに対応するｃＤＮＡ断片の特異的増幅を試みた。受粉後６、８、１０日目の未熟種子からＳＤＳ・フェノール法によって全ＲＮＡを抽出し、オリゴｄＴセルロースカラムに通してポリＡ＋ＲＮＡを分取した。このポリＡ＋ＲＮＡから逆転写酵素を用いてｃＤＮＡの片側１本鎖を合成した後、このｃＤＮＡ鎖を鋳型にしてポリメラーゼ連鎖反応を行った。プライマーにはｄＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴとｄＣＡＧＣＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＣＡＡＣＡＡＣＣを用い、アニーリング温度を４５℃にして連鎖反応を４０回繰り返した。その結果、１．３ｋｂｐと１．５ｋｂｐの２種類のｃＤＮＡ断片が特異的に増幅された。
• カテゴリ: 育種 受粉 はだか麦