バチルス菌の産生する殺虫性毒素の特異性評価法（２５８）

• 課題番号: 1995001439
• 研究機関名: 果樹試験場（果樹試）
• 研究分担: 保護・天敵微研
• 研究期間: 継Ｈ０５～Ｈ０７
• 年度: 1995
• 摘要: バチルス菌の殺虫活性の有無と強弱に関連する内毒素の性状を究明し生化学的性状に基づく殺虫性評価法を開発する目的でＢａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ（Ｂｔ） ｓｅｒｏｖａｒ ｓｏｔｔｏに属し殺虫活性の異なる菌株つまり基準株（カイコに強毒）、ＡＦ１０１株（カイコに低毒でアメリカシロヒトリに強毒）、１２２－１株（カイコに低毒でアメリカシロヒトリに無毒）の作るｐａｒａｓｐｏｒａｌ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ（ＰＩ）を精製後可溶化し殺虫性毒素蛋白質（可溶化ＰＩ）をイオン交換クロマトグラフィー等を用いて精製し性状比較した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる分子量測定の結果１２２－１株のトリプシン処理毒素蛋白質は他の菌株の分子量より大きく約９５ｋＤａだった。供試昆虫に依存する生物検定法以外の殺虫活性検定法のため中腸遊離細胞への毒素影響を調べた。遊離細胞の調製及び毒素の影響調査は、カイコ５齢４日目幼虫の摘出中腸（約０．５ｍｇ）をヒアルロニダーゼ（０．１ｍｇ／ｍｌ）を含む１０ｍｌのグレース培地（０．００５％フェニルチオ尿素とペニシリン、ストレプトマイシン添加）中で室温で３０分間静置後ピペッテングにより細胞を遊離させ毒素液（トリプシンを加えて２７℃で２０分間消化し活性化したもの）を遊離細胞液の１／１０容加え細胞の形状変化を位相差顕微鏡で観察した。毒素液添加５分後に円筒細胞で胞状の突起物が形成され肥大した。中腸遊離細胞を用いた試験管内でのＢｔ菌毒素の殺虫活性の検定が可能になった・
• カテゴリ: 病害虫 カイコ 害虫 生物検定法 評価法 防除