牛培養肝細胞を用いた内因性エンドトキシンの毒性評価法と防除法のための基礎的検討（１７３）

• 課題番号: 1995003637
• 研究機関名: 家畜衛生試験場（家畜衛試）
• 研究分担: 研三飼料安全・毒性病理研毒性薬理研病理２研
• 研究期間: 継Ｈ０５～Ｈ０７
• 年度: 1995
• 摘要: プラスチックシャーレ接着法による牛Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞の分離方法は収率が低く、また内皮細胞等の混入でＫｕｐｆｆｅｒ細胞の純度が６０－８０％と低いため、高度な分離方法であるｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ法（ＣＥ法）による分離を検討した。ＣＥ法で分離したＫｕｐｆｆｅｒ細胞を、１０％補体不活化子牛血清加ＲＰＭＩ１６４培地で１ｘ１０Ｅ６ ｃｅｌｌ／ｍｌに調整し、培養４８－７２時間後に市販のＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１：Ｂ４由来）を添加し、培養上清中のサイトカイン（ＴＮＦ、ＩＬ－６）を定量した。ＣＥ法では、遠心速度３２５０ｒｐｍ、流出速度４５ｍｌ／ｍｉｎ～６０ｍｌ／ｍｉｎの画分に純度８５～９０％の細胞が得られた。Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞の収量は、子牛１頭の尾状葉（約１００ｇ）当たり１０～５ｘ１０Ｅ７個で、９５％以上が生細胞であった。ＬＰＳを培地に添加したところ、３時間後から培地中ＩＬ－６が上昇し、９－１２時間でピークに達し、２４時間後には低下した。ＴＮＦはＬＰＳに反応しなかった。
• カテゴリ: 病害虫 評価法 防除