非セルロースβーグルカン分解酵素の機能解明と遺伝子構造の解析（２１３）

• 課題番号: 1999002446
• 研究機関名: 北海道農業試験場（北海道農試）
• 研究分担: 地域基盤・冷害生理研
• 研究期間: 継Ｈ０９～Ｈ１２
• 年度: 1999
• 摘要: １０年度は、イネｃＤＮＡを鋳型とし、９年度に精製したイネ１，３；１，４－β－グルカナーゼの一次構造に基づくプライマー（ＡＴＧＡＧＣＧＣＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＣ， １９ ｍｅｒ）とオオムギの同遺伝子の塩基配列に由来するプライマー（ＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＧＧＴＡＧＡＣＧＴＧ， ２０ ｍｅｒ）とを組み合わせて用いてＰＣＲ法を行った結果、予想される１Ｋｂ～０．９Ｋｂの長さの断片が得られた。このＰＣＲ断片をプローブに使用し、イネｃＤＮＡライブラリーの１次検索を行ったところ、約６万クローン当たり１０以上の１，３；１，４－β－グルカナーゼ遺伝子を含むクローンが単離され、現在までに３次検索まで終了し、複数のクローンを得ることができた。イネのキシログルカン・エンドトランスグリコシラーゼ（ＸＥＴ）遺伝子の断片をプローブとして使用し、イネｃＤＮＡライブラリーを検索した結果、３次検索の後、ＸＥＴ遺伝子の全長を含むと考えられるクローンを単離した。このＸＥＴ遺伝子に基づく推定アミノ酸配列をオオムギやコムギなどのそれらと比較し、よく保存されている塩基配列を確認した。この遺伝子の発現量をノーザン法で比較し、発芽約４日目で最大に達した後、徐々に減少することを明らかにした。また、２８℃で８日間暗発芽させたイネ苗に５℃で低温処理を行うと、１～２日で発現量が増大することから、本遺伝子の発現と低温との関連が示唆された。
• カテゴリ: 大麦 寒地 すぐり