土壌微生物の分類と生存適応機構の探索（４０）

• 課題番号: 35
• 研究機関名: 農業生物資源研究所
• 研究分担: 遺資二・微生保存研
• 研究期間: 完９～１３（１２）
• 年度: 2000
• 摘要: 土壌伝染性病原細菌 Ralstonia solanacearum（RS）の類別および土壌中での動態解析に用いるために、RSを特異的に検出する抗体を作製し、その諸特性を検討した。分離宿主および産地の異なる８菌株について、生菌あるいは熱処理菌をそれぞれウサギまたはマウスに免疫してポリクローナル抗体（PCA）およびモノクローナル抗体（MCA）を作製した。各PCAの反応力価は 30,000～100,000倍であり、検出限界能は 10,000～100,000 cfu/mlであった。作製された４種のPCAは菌種間レベルで RSに高い特異性を示した。国内産 80菌株に対する特異性を検討した結果、抗体および菌株間で反応性が異なり、型別が可能であった。マウス免疫により２２株のMCAが樹立され、培養上清の力価は 100～1,000倍であり、またアイソタイプは１８クローンが IgM、４クローンが IgGであった。クローンＡ（IgG）によりRSの検出感度はサンドイッチ法で 1,000～10,000 cfu/mlであった。作製されたＭＡＢは反応特異性から５つに類別でき、うち３つはRSに特異的で、それぞれ分離源の異なる菌株を識別し、他の２つは他属種細菌に存在する共通のエピトープを認識した。以上の結果から、同抗体でRSが類別できるとともに、RSの土壌中の動態解析に利用できると考えられた。