牛ウイルス性乳頭炎の調査および診断法の開発（５４）

• 課題番号: 36
• 研究機関名: 家畜衛生試験場
• 研究分担: ウイルス病・ウイ生態研; 北海道・臨床微物研; 総合診断・病原診断研
• 研究期間: 完１１～１２
• 年度: 2000
• 摘要: 牛のウイルス性乳頭炎の原因と考えられるパラポックスウイルス（ＰＰＶ）および牛ヘルペスウイルス２型（ＢＨＶ－２）について、全国各地から集めた牛血清を使用し抗体調査を行った。ＰＰＶに関しては、野生動物を含めた広範囲の動物種について疫学調査ができるよう、寒天ゲル内沈降試験とともにｐｒｏｔｅｉｎ ＡＧを使用したＥＬＩＳＡを開発した。ＢＨＶ－２に関しては補体要求性中和試験を行った。牛のＰＰＶ抗体陽性率は７０％以上で陽性牛は広域に存在した。また、ニホンカモシカに高率に陽性例が認められた。牛のＢＨＶ－２抗体陽性率は約１％で、数県で局地的に陽性牛が検出された。高感度で特異的な迅速遺伝子診断法として、ＰＰＶはｓｅｍｉ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲを開発した。ＰＣＲ産物の制限酵素切断像により４種類のウイルスの分類が可能となった。ＢＨＶ－２はｓｈｕｔｔｌｅ ＰＣＲで迅速な診断が可能となった。病性鑑定依頼材料を含む多数の野外発症例（牛、羊、山羊、ニホンカモシカ）の病変組織でＰＣＲによるＰＰＶ感染症の診断を実行した。免疫染色に使用可能なPPVに対するポリクローナル抗体を作製した。ＢＨＶ－２に対するモノクローナル抗体作製では、内部抗原と反応する２株をクローニングした。開発された抗体検査法やＰＣＲによる遺伝子診断法は、全国の家畜保健衛生所で活用されている。口蹄疫の類症鑑別診断法としても使用されている。
• カテゴリ: シカ 羊 山羊