プロテオーム解析技術による植物ホルモン情報伝達機構の解析

• 課題番号: 2002002703
• 研究機関名: 農業生物資源研究所
• 研究分担: 農業生物資源研究所 植物生命科学研究部門 分子遺伝研究グループ 遺伝子応答研究チーム; 農業生物資源研究所 植物生命科学研究部門 生体高分子研究グループ 生体膜機能研究チーム
• 研究期間: 継続2001～2002
• 年度: 2002
• 摘要: イネ・細胞内小器官のプロテオーム解析については、各器官のタンパク質を精製・構造解析し、500種類のタンパク質の構造を決定しデータベース化を図った。また、カルレテイキュリンと相互作用するストレス応答性に関与するCRTintP1と植物ホルモン応答性に関与するCRTintP2の遺伝子単離、機能解明を行った。植物ホルモンで誘導されるcDNAを貼り付けたアレイを作成し、ジベレリン・ブラシノステロイドで誘導される機能未知遺伝子群を単離した。既存の特許を回避するベクターを構築し、イネの改変ブラシノライド受容体遺伝子（OsBRI1)の導入によって直立葉を示したどんとこいで、ホモ個体の選抜と非閉鎖系での安全性評価を実施している。さらに、茎葉で活性の高いD18プロモーターを用いた新たなベクターで、コシヒカリの形質転換体を得たが葉の直立程度は低かった。また、2ベータ水酸化酵素をD18で制御した場合も、アクチンプロモーターに比べて茎の短縮はみられず、種子数が減少した。イネにおけるタンパク質の相互作用を調べる方法について試行錯誤を行った。その一つとして、ツーハイブリッド法用のライブラリーを作製し、親和性タンパク質の同定にとりかかった。さらに融合タンパク質を発現させ、一対多の相互作用を検出するシステムの確立及び、二次元ブルーネイティブ電気泳動の最適化を行った。見出された親和性タンパク質の数は少ないが、それらの質量分析による同定を行っている。
• カテゴリ: データベース