酵素抗体法によるアブラナ科野菜根こぶ病菌の検出

• 担当機関: 中国農業試験場
• 研究期間: 1997～1999
• 研究担当者: 宮川久義; 山本孝し; 折原詳子
• 発行年度: 1997
• 要約: アブラナ科野菜根こぶ病菌休眠胞子から作成したポリクロ－ナル抗体を用いた 酵素抗体法により，罹病植物組織および人工汚染土壌から根こぶ病菌休眠胞子の検出が可能である。
• 背景・ねらい: アブラナ科野菜根こぶ病の唯一の伝染源である休眠胞子は，土壌中で長期間生存することができ，この耐久性が本病の防除を困難にする大きな要因となっている。そこで，休眠胞子を抗原として抗血清を作成し，これを用いて土壌および罹病植物組織から休眠胞子の濃度を測定する方法を確立する。

成果の内容・特徴

1. 罹病植物から根こぶ病菌休眠胞子を精製し，これを抗原として抗血清を作成した。得られた抗血清を用いてELISA（間接法），DIBAおよびTBIA（スタンプ法）の３種類の酵素抗体法により，罹病植物組織および人工汚染土壌から根こぶ病菌休眠胞子を検出する方法を確立した。
   
2. 試料（検体）を直接マイクロタイタ－プレ－トに吸着させるELISAおよびニトロセルロ－スシ－トにプロッテイングするDIBAでは，精製した休眠胞子は１ml 当たりの胞子濃度が10² 個まで，罹病植物組織からは10² ～10⁴ 個まで検出することができる（図１左，図２左）。同様に，市販の園芸培土に休眠胞子を混合して作成した人工汚染土壌からは土壌１ｇ当たり10⁴ 個まで検出が可能である。この場合，検出精度を上げるため，試料を100℃，15分間加熱処理する（図１右，図２右）。
   
3. 罹病植物組織の断面をニトロセルロ－スシ－トに軽く押しつけDIBAと同様の方法で反応させるTBIAでは，罹病組織内の根こぶ病菌の分布濃度，存在部位などを特異的に検出できる（図３）。
   

• 成果の活用面・留意点: 自然汚染土壌では土壌の種類によって，非特異的な反応が大きく，安定した結果が得られない場合が多い。
• カテゴリ: 病害虫 あぶらな 防除