カンキツグリーニング病病原体の遺伝子診断法による確認

• 担当機関: 果樹試験場
• 研究期間: 1995～1996
• 発行年度: 1996
• 要約: カンキツグリーニング病様症状を呈するカンキツ樹から穂木を採取し、検定植物であるオーランドタンゼロに接種して生物検定を行った。さらに簡易で精度の高い遺伝子診断法のPolymerase chain reaction(ＰＣＲ）法の開発を行い、本法でも検定を行って本病の発生を確認した。生物検定法とＰＣＲ法による検定結果は一致していた。
• 背景・ねらい: カンキツグリーニング病は海外で深刻な被害をもたらしている重要病害である。本病原体の簡易で精度の高い遺伝子診断法を確立し、本邦での発生確認に利用して防除対策の確立に役立てる。

成果の内容・特徴

1. 　検定植物のオーランドタンゼロに接種し、約30℃の人工気象器に保って病徴発現を観察した結果、採取した７地点で本病の発生が確認された。
   
2. 　カンキツ葉からＤＮＡ抽出後、１６ＳリボゾームＲＮＡ遺伝子のグリーニング病病原体特異的プライマー(Forward GCGCGTATGCAATACGAGCGGCA, Reverse GCCTCGCGACTTCGCAACCCAT)を用いたＰＣＲ反応（92℃、60秒、47℃、30秒、72℃、90秒）により、約1200bpの特異的な増幅が認められた(図）。
   
3. 　生物検定法とＰＣＲ法による検定結果は一致した。
   
4. 　圃場より採取したサンプル（葉）から、ＰＣＲ法により簡易に高精度で検定が可能であった。
   

• 成果の活用面・留意点: 圃場での発生状況調査に用いる。今回採取したサンプルではすべて本プライマーで反応したが、海外では病原体の変異株の存在が知られているので、生物検定を一部併用することが好ましい。
• カテゴリ: 病害虫 栽培技術 生物検定法 発生要因分析 防除 その他のかんきつ