COI領域の変異に基づくハモグリバエ3種の簡易同定法

• 担当機関: （独）農業技術研究機構 近畿中国四国農業研究センター
• 研究期間: 2001～2003
• 研究担当者: 三浦一芸; 太田泉; 大泰司誠; 田上陽介（広島大学）
• 発行年度: 2001
• 要約: COI（Cytochrome oxidase subunit I ）領域に特異的なプライマーを利用してPCR法を行い、その断片長を比較することにより、形態的観察による同定が困難なトマトハモグリバエ、マメハモグリバエ、ナスハモグリバエ3種が判別できる。
• キーワード: ハモグリバエ、COI、PCR法、プライマー
• 背景・ねらい: ハモグリバエ類、特にマメハモグリバエLiriomyza trifolii、トマトハモグリバエL. sativae、ナスハモグリバエL. bryoniae は広範囲の農作物に被害を及ぼしている。これら3種は雌成虫や幼虫での形態的識別は困難なため、発生消長や動態の詳細な解析が難しく、的確な防除に支障をきたしている。そこで、遺伝子マーカーによるハモグリバエ3種の同定法を確立する。
• 成果の内容・特徴: 1.; 0.2mlのサンプルチューブにハモグリバエを個体別に入れ、磨砕液30μl（1M Tris-HCl、0.5M EDTA、5N NaCl、Chelex）中でプラスチック爪楊枝により磨砕し、Proteinase Kを2μl加えて56.0℃で2時間以上、続いて99.9℃で3分処理した抽出液をPCR法に用いる（1μl／反応）（図1）。この方法で微小な個体に対して効率的にDNA解析を行うことができる。; 2.; マメハモグリバエ、トマトハモグリバエおよびナスハモグリバエの3種ではCOI領域（約600bp）の塩基配列の解析結果において、複数の塩基配列に差異がある。それらの差異を利用し3種を識別可能なプライマーを設計する（図2）。; 3.; TaKaRa社製の簡易PCR用試薬（PerfectShotTMExTaq）の0.2mlのサンプルチューブに4つのプライマーを入れ滅菌水で50μlにする。それをPCR用器械で92℃で1分、50℃で1分、72℃で1分30秒35回繰り返す。そのサンプルを1％のアガロースゲルの電気泳動法により、トマトハモグリバエでは3本（約600bp、約400bp、約200bp）、マメハモグリバエでは2本（約600bp、約200bp）、ナスハモグリバエでは1本（約600bp）のバンドが検出される（図3）。したがって、バンドの位置や数により3種のハモグリバエを容易に区別できる。この方法で各地のハモグリバエが判別可能であることを確認した。また、卵から成虫までの各ステージで判別が可能である．
• 成果の活用面・留意点: 1.; 各地圃場に発生しているマメハモグリバエ、トマトハモグリバエおよびナスハモグリバエが区別できるため、害虫管理に広く活用できる。
• カテゴリ: 病害虫 害虫 トマト なす 防除