エンドファイトのiaaM 遺伝子導入形質転換体の作出

• 担当機関: 草地試験場
• 研究期間: 1998～1999
• 研究担当者: Ahmad Yuns（岡山大）; 山田哲治（岡山大）; 島貫忠幸
• 発行年度: 1999
• 要約: エンドファイトを植物への有用遺伝子の導入に利用するために、イネ科牧草のネオティフォディウム・エンドファイトにiaaM遺伝子（トリプトファンモノオキシゲナーゼ遺伝子）を導入した形質転換体を作出した。
• 背景・ねらい: 植物とエンドファイトは共生関係にあるために、エンドファイトに有用遺伝子を取り込んだ形質転換体を作出し、これを植物へ導入すれば有用遺伝子の発現が予想される。本研究では牧草のエンドファイトに、植物生長ホルモンIAAの前駆体であるIAM（インドールアセトアミド）産生遺伝子（iaaＭ遺伝子）を導入した形質転換体を作出する方法を開発する。

成果の内容・特徴

1. エンドファイト（Neotyphodium typhinum、チモシー由来）のプロトプラストは、ジャガイモ煎汁液体培地で 22℃、5－6日間振とう培養して得た菌体をノボザイム234処理すると大量に得られた。
   
2. エンドファイトにオリーブこぶ病細菌のiaaM遺伝子(トリプトファンモノオキシゲナーゼ遺伝子、図1)を導入する形質転換体の作出には、ポリエチレングリコール(PEG)を用いる方法がエレクトロポレーション法よりも優れていた。
   
3. 形質転換体のiaaM遺伝子の染色体DNAへのとり込みは、PCR法によるiaaM遺伝子の増幅により確認した（図２）。形質転換体の培養濾液中には、非形質転換体では認められなかったインドールアセトアミドが産生されていた。また、IAAの産生量も形質転換体で増加していた（図 3）。
   

成果の活用面・留意点

1. この形質転換体を植物に接種すれば、植物生育が促進されると考えられ、エンドファ　イトを利用した新たな遺伝子導入法となる。
   
2. この形質転換体については、寄主植物への感染能、家畜毒性アルカロイド産生については　検討が必要である。
   

• カテゴリ: オリーブ ばれいしょ