RT-nested PCR法による七面鳥鼻気管炎ウイルスの検出

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1995～1997
• 発行年度: 1995
• 要約: 七面鳥鼻気管炎ウイルス（TRTV）を高感度で検出するRT-nested PCR法を開発した。本法を頭部腫脹症候群（SHS）発症鶏材料に応用したところ、TRTV が高率に検出され、TRTVとSHSの関連性が示唆された。
• 背景・ねらい: 七面鳥鼻気管炎ウイルス（Turkey rhinotracheitis virus; TRTV）は当初七面鳥に 呼吸器症状を引き起こすウイルスとして報告された。しかし近年多発している 鶏の頭部 腫脹症候群（Swollen head syndrome; SHS）の発症に、TRTVが関与している可能性が 示唆されている。これまでも国内のSHS発症鶏において高率にTRTV抗体が検出さ れているが、TRTVの分離は鶏腎細胞や発育鶏卵を用いた方法では困難なため容易 ではない。そこで高感度なウイルス検出法としてRT-nested PCR法を開発し、SHS発 症鶏におけるTRTVの検出に応用した。

成果の内容・特徴

1. 既に報告されているTRTV-3B株のF蛋白質遺伝子塩基配列を基に2組のプライマーを作製した（図1）。
   
2. RTV-14/1株培養上清及びウイルス感染細胞からRNAを抽出し、上記のプライマーを用いRT-nested PCR法にてウイルスの検出を実施したところ、目的とする遺伝子増幅が確認された（図2）。他の鶏の呼吸器病ウイルス材料では遺伝子の増幅は認 められず、本法の特異性が確認された。
   
3. このRT-nested PCR法では0.4TCID₅₀のウイルス培養上清からウイルスの検出が可能で、非常に高い検出感度を示した。
   
4. このRT-nested PCR法を用いて野外SHS発症鶏の1群5羽からTRTVの検出を試みたところ、1例の気管及び4例の鼻腔から検出され、TRTVとSHSとの関連性が示唆された（図3）。
   

• 成果の活用面・留意点: TRTVに対するこのRT-nested PCR法は特異性が高く、検出感度及び迅速性の点で ウイルス分離に比べ極めて優れていることが判明した。野外のSHS発症鶏の病原学的 検査において、本法の応用はTRTVの本病への関与を調べる上で非常に有用であると考 えられる。
• カテゴリ: 鶏