カイコRFLP連関検索のためのＤＮＡ簡易調製と評価法

• 担当機関: 蚕糸・昆虫農業技術研究所
• 研究期間: 1993～1993
• 発行年度: 1993
• 要約: RFLP連関検索に必要な個体別のDNA簡易調製法を確立し、これを用いたノンアイソトープ系でのサザーン法による評価法を確立した。
• 背景・ねらい: バイテク等の新育種法による有用形質の付与技術の開発や、昆虫新; 産業確立のための昆虫機能利用分野において、カイコのジーンマッ; ピングは重要なテーマである。; 遺伝子マッピングの方法としては、カイコがキイロショウジョウバ; エに比べて有利な点を利用して、RFLPを用いた3点実験による連関; 検索、座位決定の方法がある。; 本研究は、マッピング技術に必要な個別体のDNAの簡便な調製法お; よびノンアイソトープによるサザーン法の確立を行った。

成果の内容・特徴

1. 関連検索に必要な両親およびF1、BF1の個体別、並びに支配した蛾
   区の卵の半分量から、通常用いているセシウム系での超遠心法に代
   わる、DNAの簡便な調製法を確立し、数10μgから数100μgのDN
   Aを得る法を開発した。
   (図1)
2. この簡便法で調製したDNAを用いて、サザーン法で連関検索を行っ
   た結果、カイコのホメオティック遺伝子BmAntpのジェノミック並
   びにcDNAクローンを蛍光標識してプローブとすると、いずれも当
   該の遺伝子がE群に連関していることが明らかであった。
   (図2)
3. アイソトープを用いないノンアイソトープ系（蛍光標識法）でのサ
   ザーンは、DIGのリボプローブによる法が最適であると判断した。
   

• 成果の活用面・留意点: 従来のセシウム系での超遠心法によらない、簡便な個体別のDNAの; 調製法が開発され、この方法で調製したDNAを用いたノンアイソト; ープ系でのサザーン法が確立された。このことによりRI実験施設、; 超遠心器等の機器類が整備されていない研究室でもサザーン法での; 連鎖解析が可能となり、ゲノム解析研究推進に役立つ。
• カテゴリ: 育種 カイコ 評価法