サンゴHSP70遺伝子の全長クローニングと発現解析

• 担当機関: 独立行政法人水産総合研究センター西海区水産研究所石垣支所
• 研究期間: 2001～2005
• 研究担当者: 阿部寧; 橋本和正; 高田宜武; 澁野拓郎
• 発行年度: 2005
• 背景・ねらい: サンゴの保全は重要な課題であるが、これまでサンゴの生理状態を評価する適当な手法が無かった。そこで適当な手法を確立するために、サンゴの遺伝子発現解析を進めている。それは環境変化（赤土の負荷など）に応答する遺伝子が見つかれば、生理状態の指標として利用できるからである。; これまでに、ディファレンシャル・ディスプレイ法（DD）を用いた解析により、懸濁赤土に応答するとみられる遺伝子が多数得られている。しかしDDには、遺伝子の一部分しか得られない、偽陽性が含まれる等の問題があった。そこで、上記の遺伝子のうちHSP70と相同性の高かった１つ（HSP70-Iと命名）について、全長にわたる塩基配列決定（全長クローニング）を行った。さらに、ノーザン解析により陽性／偽陽性の判定を行った。

成果の内容・特徴

1. HSP70-IのcDNAは全長約2500塩基対で、669アミノ酸残基から成るタンパクをコードしており（図1）、そのアミノ酸配列はアメフラシBiP（HSP70の一種）に最も良く似ていた（78.2％の相同性）。
2. ハナヤサイサンゴを赤土（国頭マージ）0、10、50、200ppm（いずれも水温21℃）、及び高水温（31℃）に2時間暴露後、RNAを抽出し、ノーザン解析を行った。HSP70-Iの発現量は赤土暴露により2.0-2.4倍に増加しており、陽性と確認できた。また、高水温暴露時にはその発現量は10倍に達していた。

• 成果の活用面・留意点: HSP70-I以外の赤土応答性遺伝子に関する同様の解析や、他のストレス要因（界面活性剤、農薬など）に応答する遺伝子の探索も進めており、今後は、これらの解析で得られる複数の遺伝子を指標とし、サンゴの生理状態やサンゴ礁環境を評価する手法を確立したい。
• カテゴリ: 病害虫 シカ 農薬