イネ黄萎病の診断技術の開発と実態解明（１４６）

• 課題番号: 1993003985
• 研究機関名: 熱帯農業研究センター（熱研）
• 研究分担: 基盤技術〔中島一雄〕
• 研究期間: 完Ｈ０１～Ｈ０４
• 年度: 1993
• 摘要: イネ黄萎病（ＲＹＤ）のＤＮＡ診断法を開発し、病原体の発生実態の解明を行った。病原体であるマイコプラズマ様微生物（ＭＬＯ）のＤＮＡを、ビスベンズイミド－塩化セシウム平衡密度勾配遠心法により、宿主のＤＮＡから分離した。ＲＹＤ－ＭＬＯは、染色体ＤＮＡ以外に、約４ｋｂの環状ＤＮＡ（染色体外ＤＮＡ）をもつことが判明した。ＭＬＯのＤＮＡを制限酵素Ｈｉｎｄ■で切断後、大腸菌－プラスミド系にクローニングした。染色体に由来するＤＮＡ断片（ＤＮＡプローブ）Ｒ９と染色体外ＤＮＡに由来する断片Ｒ３２等は、日本、タイ、フィリピンで採集したＲＹＤ羅病株のＤＮＡと反応したが、健全植物、他の種類のＭＬＯ、培養可能なマイコプラズマ類のＤＮＡとは反応しなかった。これらのＤＮＡを用い、媒介昆虫であるツマグロヨコバイからＭＬＯを検出することにも成功した。またＤＮＡプローブを用いることにより、従来より短時間に高感度でＲＹＤ－ＭＬＯを検出できるようになった。染色体外ＤＮＡプローブを用いて、日本、タイ、フィリピンのＲＹＤ－ＭＬＯの染色体外ＤＮＡの電気泳動パターンを比較したところ、地域により異なっていることが判明した。結果、アジア各地に発生しているＲＹＤ－ＭＬＯは遺伝的に近縁で相同性が高い染色体外ＤＮＡを持っているが、染色体外ＤＮＡの大きさ、数、構造等は多様であることが判明した。
• カテゴリ: 亜熱帯 診断技術