ＭＨＣの特異的検出法の確立とＭＨＣ遺伝子複合体のＲＦＬＰ解析：ＲＦＬＰ解析に適したプローブの作成（１３）

• 課題番号: 1995000830
• 研究機関名: 畜産試験場（畜試）
• 研究分担: 育種・形質発現研
• 研究期間: 完Ｈ０５～Ｈ０６
• 年度: 1995
• 摘要: ＭＨＣ純系ミニブタの開発に資するため、ブタＭＨＣのＲＦＬＰ解析に適するｃＤＮＡプローブを作出する。ブタＭＨＣクラス２のＤＲＢ、ＤＱＡ及びＤＱＢ遺伝子につき白血球全ＲＮＡを鋳型としたＲＴ－ＰＣＲを行い、ｃＤＮＡの増幅を行った。プライマーは、クラス２遺伝子の機能上重要なエクソン１全体を増幅できるように、リーダーエクソンとエクソン２部分に設定した。また、ＲＴ－ＰＣＲはパーキンエルマー社のｒＴｔｈ Ｒｅｖｅｒｓ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅを用いるＲＴ－ＰＣＲキットを使用した。ＲＴ－ＰＣＲの条件は、ＲＴ：６０℃ １０分、７０℃ １５分；ＰＣＲ９５℃ ２分（１サイクル）、９５℃ １分・７２℃ １分（３５サイクル）、７２℃ ７分（１サイクル）でホットスタートで行った。この方法により、ＤＲＡ、ＤＲＢ、ＤＱＡ及びＤＱＢそれぞれ５５０ｂｐ、４０１ｂｐ、５４０ｂｐ、３６４ｂｐの目的としたサイズのＤＮＡを増幅することができた。さらに、このＲＴ－ＰＣＲ産物を精製し、同一プライマーを使用したサイクルシークエンスをＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ法で行い、目的ＤＮＡ部分であることを確認した。以上、本課題の目的としたＭＨＣ遺伝子のｃＤＮＡを得ることができた。
• カテゴリ: 育種 豚