非感染性特異抗原を用いた新しい豚コレラ抗体検出技術（ＥＬＩＳＡ）の開発（１４９）

• 課題番号: 1997003824
• 研究機関名: 家畜衛生試験場（家衛試）
• 研究分担: 海外病・免疫研（チッソ株式会社横浜研究所）
• 研究期間: 継Ｈ０８～Ｈ１０
• 年度: 1997
• 摘要: 豚コレラウイルス（ＣＳＦＶ）のＧＰＥ－株のＥ２遺伝子領域をＲＴ－ＰＣＲ法クローニングした。これをバキュロウイルストランスファーベクターｐＡｃＹＭＩ、ならびに狂犬病Ｇ蛋白のシグナルペプチドとの融合蛋白を発現するトランスファーベクターｐＡｃＲＶＳＧにサブクローニングした。バキュロウイルスとのレコンビネーションにより作製された組換えウイルス（ＡｃＹＭＩ／Ｅ２ならびにＡｃＲＶＳＧ／Ｅ２）によるＥ２蛋白の発現を、蛍光抗体法ならびにウエスタンブロット法で確認した。７種のＥ２に対するモノクローナル抗体を用いて間接蛍光抗体法を行ったところ、ＡｃＲＶＳＧ／Ｅ２感染細胞ではすべてのモノクローナル抗体と反応したが、ＡｃＹＭＩ／Ｅ２感染細胞ではそのいくつかとしか反応しなかった。また、ＡｃＲＶＳＧ／Ｅ２感染細胞はＥ２に対するモノクローナル抗体ならびに豚の免疫血清を用いたウエスタンブロット法で約６０ｋｄの位置に特異的なバンドが検出された。以上の結果から、豚コレラウイルスの糖蛋白質の発現にｐＡｃＲＶＳＧを使用することによってウイルス本来のＥ２蛋白に近い組換え蛋白が効率的に発現できることが確認された。
• カテゴリ: シカ 豚