セロオリゴ糖生成酵素系の遺伝子（２０８）

• 課題番号: 222
• 研究機関名: 食品総合研究所
• 研究分担: 応微・酵素利用研
• 研究期間: 継７～９～（１２）
• 年度: 2000
• 摘要: Clostridium thermocellum YM-4由来のセロデキストリンホスホリラーゼ（ＣＤＰ）のクローニングを試みた。既知のセロビオースホスホリラーゼ（ＣＢＰ）、ＣＤＰ遺伝子の配列情報からプライマーを設計し、ＰＣＲ法にてＣＤＰ遺伝子の内部配列を含む断片を増幅した。ＴＡＩＬ－ＰＣＲ法により3'末端及び5'末端側をさらに増幅し、ＣＤＰ遺伝子の全長をクローニングした。その結果C. thermocellum YM-4 ＣＤＰ遺伝子は、2952 bpのＯＲＦにより構成されていることがわかった。塩基配列より酵素タンパクは984アミノ酸残基，分子量111,729.3であると計算された。本酵素のアミノ酸配列は、C. thermocellum ATCC27405 CDPと92%，C. sterocorarium CDPと22%，各種起源のCBPとは約20%の相同性を示した。本酵素遺伝子を大腸菌にて発現し、発現タンパクの性質を調べた。本酵素はセロビオースとグルコース－１－リン酸とからセロオリゴ糖のシリーズを生成しかつグルコースをアクセプターとしない点、セロトリオース以上のセロオリゴ糖を加リン酸分解するがセロビオースは加リン酸分解しない点などから、本遺伝子がセロデキストリンホスホリラーゼ遺伝子であることが確認できた。