α－ガラクトシダーゼの基質認識機構の解明（２４２）

• 課題番号: 205
• 研究機関名: 食品総合研究所
• 研究分担: 生物機能・分子情報研
• 研究期間: 完７～１２
• 年度: 2000
• 摘要: αーガラクトシダーゼは糖脂質や多糖、オリゴ糖からガラクトースを遊離するエキソ型の酵素であり、生物全般に広く分布している。本酵素についてはいくつかの酵素の一次構造が明らかになっているのみで、触媒残基についてもほとんど情報がない状態である。本研究では、基質特異性の異なるαーガラクトシダーゼの構造と機能の相関を解明する。１１年度までに３種類のカビ由来のαーガラクトシダーゼとイネのαーガラクトシダーゼを単離し、その性質を検討した。また、クローニングにより一次構造を明らかにした。さらに、イネのαーガラクトシダーゼの高分子基質及びオリゴ糖に対する特異性の関連を検討した。その結果、高分子基質に対して効率的に作用するものはガラクトースが直鎖状に結合したオリゴ糖基質と側鎖状に結合したオリゴ糖基質の両方によく作用するが、オリゴ糖基質の一方にしか作用できない酵素は高分子基質には作用できないことを明らかにした。１２年度は、イネα－ガラクトシダーゼの立体構造解明のための単結晶の調製を行い、さらに好熱菌Ｔｈｅｒｍｕｓ ｓｐ． Ｔ２由来α－ガラクトシダーゼの唯一のシステインをアラニンに変換した変異体の解析によりシステインは活性とは直接関係しないことを明らかにした。