家畜の細菌感染防御に関与する遺伝子の構造解析（２９）

• 課題番号: 20
• 研究機関名: 家畜衛生試験場
• 研究分担: 細菌寄生虫・病原機能研
• 研究期間: 完６～１２
• 年度: 2000
• 摘要: 豚脾臓から付着細胞を回収し，正常食細胞ｃＤＮＡライブラリーを作製した。次に豚脾臓由来培養食細胞に，豚丹毒菌を感染させｍＲＮＡを回収し，感染食細胞ｃＤＮＡライブラリーを作製した。正常及び感染食細胞ライブラリーよりそれぞれビオチン化したアンチセンス鎖のＲＮＡ及びセンス鎖の１本鎖ＤＮＡを合成してサブトラクション法を実施し，得られた１本鎖ＤＮＡより約２００クローンのサブトラクトｃＤＮＡライブラリーを得た。３’末シーケンス解析を行い，ポリＡtailを持つクローンについてデータベース解析を行ったところ既報の遺伝子とホモロジーが高いものは８個であった。ホモロジーが高かった５つのクローンよりプローブを作製し，正常食細胞及び感染食細胞由来ＲＮＡに対するノーザンハイブリダイゼーションを行ったところ，ブタＴＧＦbetaと相同性を持つクローンは感染時シグナルの強度に約３．２倍の差が認められた。本クローンの配列はブタＴＧＦbeta１，２，３の共通領域を含んでおり，シグナル強度の差は感染・非感染にかかわりなく発現しているＴＧＦbetaアイソタイプの影響も否定できず，全長遺伝子の単離を試みたところ，得られた遺伝子はブタＴＧＦbeta１であった。この配列は感染ライブラリーからのみ増幅されたことから，豚丹毒菌感染時にＴＧＦbeta１が強く発現することが示唆された。
• カテゴリ: 害虫 データベース 豚