α-ガラクトシダーゼの機能発現機構の解明

• 課題番号: 2002003005
• 研究機関名: 食品総合研究所
• 研究分担: 食品総合研究所 生物機能開発部 分子情報研究室
• 協力分担関係: 農業生物資源研究所
• 研究期間: 継続2001～2005
• 年度: 2002
• 摘要: アルファ-ガラクトシダーゼの活性部位に存在するアスパラギン酸を非天然アミノ酸に置き換える手法としてのプロテインライゲーション法の効率的な適応を目指し、本酵素のリフォールディングの効率を調べ、更にC末端にチオエステルを含む約30アミノ酸からなるペプチドを合成した。一方、イネアルファ-ガラクトシダーゼの阻害剤であるガラクトースの存在下、単結晶を調製し、X線結晶解析を行い、1.9オングストロームＡの解像度でアルファ-ガラクトシダーゼの立体構造を解明した。本酵素はTIMバレル構造の活性ドメインとベータ-ストランド主体のC末端ドメインからなっていた。活性部位にガラクトース分子が確認され、ガラクトースの1位の水酸基を挟んでAsp130とAsp185が活性残基として存在することを明らかにした。