キクわい化ウイロイドの感染性cDNAクローンの作製

• 担当機関: （独）農業・食品産業技術総合研究機構 花き研究所
• 研究期間: 2007～2008
• 研究担当者: P.K.R.Kumar（産総研）; 松下陽介
• 発行年度: 2008
• 要約: キクわい化ウイロイドの感染性cDNAクローンを合成した。これを鋳型にして合成したCSVd RNAは、天然のCSVdと同様に宿主植物への感染力をもち、接種試験に利用できる。
• キーワード: キクわい化ウイロイド、感染性cDNAクローン、RNA
• 背景・ねらい: キクわい化病の病原体であるキクわい化ウイロイド(Chrysanthemum stunt viroid; CSVd)はキクの難防除病原体の１つである。これまでにCSVdの感染性cDNAクローンが作製されていないことから、人為的に変異体を作製できず、塩基配列の解析を行うことができなかったために、分子生物学的な研究はほとんどなされていない。そこで、CSVdの感染性cDNAクローンの作製を試み、その評価を接種試験で行なう。

成果の内容・特徴

1. T7 RNAポリメラーゼでRNAを合成できるように（表１）のプライマーを設計した。このプライマーを用いてT７プロモーターの配列を５’側に付加したCSVdの全長cDNAを作製した。
2. それを鋳型にして合成した直鎖状のCSVd RNAをイソギクに機械的接種すると、感染植物から抽出・精製した天然のCSVdと同様に、CSVdの感染が確認できる（表２）。
3. 一方、鋳型として用いたcDNAやその配列をもつプラスミドには感染性は認められない。
4. 合成CSVd RNAを宿主植物に接種すると、イソギク、トマト、アゲラタムからは４週間後に、シュンギクからは８週間後にCSVdが検出される（表３）。
5. 合成CSVd RNAの接種によってCSVdが感染したイソギクまたはトマトから、CSVd RNAを抽出し、そのRNAを健全なトマトに接種するとCSVdの感染が確認できる。
6. 以上のことから、本方法によって合成されたCSVd RNAはCSVd宿主植物に感染し、複製能を持ち、接種試験に利用できることを初めて示した。
   

成果の活用面・留意点

1. CSVdの感染性cDNAクローンの確立によって、任意のCSVdの変異体の作製が可能となり、CSVdの植物体内における移行や複製の解明に利用できる。
2. CSVdの感染性cDNAクローンを用いることで、安定的にCSVdの接種試験を実施できる。

• カテゴリ: 病害虫 アゲラタム きく しゅんぎく トマト 防除