ＰＣＲ法を用いたイネ白葉枯病菌の迅速検出法

• 担当機関: 石川県農業総合研究センター
• 研究期間: 1999～2002
• 発行年度: 1999
• 要約: Xanthomonas属細菌の16Ｓ-23ＳrDNAのＩＴＳ領域の塩基配列を比較し、イネ白葉枯病菌に特異的なＰＣＲプライマーを作製した。本プライマーを用いたＰＣＲにより、無病徴の植物体からも迅速に病原細菌を検出できる。
• 背景・ねらい: イネ白葉枯病菌は細菌性の難防除病害であり、事前の発生予察が肝要である。特に病原菌の消長を追跡することは非常に重要であるが、従来の病原菌モニタリング手法は多くの労力と時間を費やし、発生予察における迅速な判断が困難であった。そこで、イネ白葉枯病菌に特異的なＰＣＲプライマーを作製し、迅速かつ簡便な検出法を開発する。

成果の内容・特徴

1. 各種植物病原細菌のゲノムDNAを抽出し、16S-23SrDNAのITS領域の塩基配列を比較し、イネ白葉枯病菌に特異的なPCRプライマー（XOR-FおよびXOR-R2）を作製した（図１）。
   
2. 本プライマーを用い、分離地の異なるイネ白葉枯病菌27菌株、同属異種菌14病原型16菌株についてPCRを行うと、イネ白葉枯病菌の全ての菌株から約470bpのDNA断片が増幅される（図２）。一方、他の病原菌からは３菌株を除き増幅が見られない（図３）。
   
3. 本法による検出手順を図４に示す。本法による病原菌の検出限界は４×10１cfu/ml、また植物体をサンプルとした検出所要時間は３時間以内であり、一度に多検体を供試できる。
   
4. 現地圃場において、サヤヌカグサ（金沢市大場町）および初発生確認12～14日前の無病徴イネからも病原菌の検出が可能である（表1）。
   

成果の活用面・留意点

1. 伝染源の一つであるサヤヌカグサにおける病原菌の存否、イネへの無病徴感染を確認できるため、発生予察の一手段となりうる。
   
2. カンキツかいよう病菌等、一部の病原細菌を誤認する可能性がある点に留意する。
   

• カテゴリ: 病害虫 防除 モニタリング その他のかんきつ