耐凍剤に添加する糖が牛バイオプシー胚の凍結・融解後の受胎性におよぼす影響

• 担当機関: 埼玉県畜産センター
• 研究期間: 1997～1999
• 研究担当者: 吉羽宣明; 高田新一郎
• 発行年度: 1998
• 要約: 性判別のためにバイオプシーした牛胚を、エチレングリコールにシュークロースまたはトレハロースを加えた耐凍剤で凍結保存し、融解後受胚牛に直接移植した。受胎率は、シュークロース区で31%、トレハロース区で66%であり、トレハロースの添加が有効であった。
• 背景・ねらい: PCR法による牛胚の性判別は、極めて精度が高い。しかし、性判別のためにバイオプシー（少量の細胞を採取）した胚は、凍結・融解後の受胎性が低下する傾向があり、凍結保存法の改善が性判別技術普及のカギとなっている。一方、移植試験においては、受胚牛や技術者などの要因が受胎率に影響をおよぼし、明確な結果が得にくいとされている。そこで、2種類の耐凍剤を用いて凍結保存したバイオプシー胚を、同一牧場の未経産牛に直接移植し、受胎率を比較した。

成果の内容・特徴

1. 黒毛和種供胚牛から採取した7日齢の胚をバイオプシーし、全体の1/10程度の細胞を採取した。バイオプシー後、1.5～4時間培養した胚を、1.8Mエチレングリコールに0.1Mシュークロース（EG+S）、または0.1Mトレハロース（EG+T）を添加したものを耐凍剤として凍結保存した。
   
2. 受胚牛は公共育成牧場で飼養されている未経産牛とし、2人の技術者が直接移植を行った。なお、技術者には、どの胚がどちらの耐凍剤で凍結されているかを知らせなかった。
   
3. EG+SおよびEG+Tを耐凍剤とした場合の受胎率は、それぞれ31.0%（9/29）および66.0%（33/50）であり、トレハロースの添加が有効であった（表1）。この傾向は、いずれの技術者の移植成績においても認められた（表2）。
   
4. EG+Tを耐凍剤として牛性判別胚を凍結保存すれば、直接移植により高い受胎率が期待できる。
   

• 成果の活用面・留意点: 移植に要する時間が長くなると、受胎率が低下する傾向が認められたが、受胎率の落ち込みは、EG+Tを耐凍剤とした場合にゆるやかであった（表3）。 ; EG+Tを耐凍剤として牛性判別胚を凍結保存すれば、直接移植により高い受胎率が期待できる。