アグロバクテリウム法によるキク品種`秀芳の力'への遺伝子導入

• 担当機関: 静岡県農業試験場
• 研究期間: 1998～2002
• 発行年度: 1998
• 要約: キク品種`秀芳の力'の茎片を用い、アグロバクテリウム法による効率的な遺伝子導入の条件を確立し、トマト黄化えそウイルス（TSWV）由来のヌクレオキャプシド遺伝子の導入に成功した。
• 背景・ねらい: 本県キク産地では、トマト黄化えそウイルス（TSWV）によるキクえそ病が蔓延しているが、本病には有効な防除法が確立されていない。また、キクへの遺伝子導入は比較的困難である。そこで、本県の主力品種である`秀芳の力'にTSWV抵抗性を付与するため、アグロバクテリウム法によるウイルスのヌクレオキャプシド（N）遺伝子の効率的な導入条件を明らかにする。

成果の内容・特徴

1. アグロバクテリウム菌株は、EHA101、LBA4404及びOPC2760が初期感染に優れている（表1）。この中ではEHA101が、導入した遺伝子産物（GFP）の発現強度が最も強く、遺伝子導入効率が高い。
   
2. 遺伝子導入の効率と除菌が容易さから、アグロバクテリウムを、50-100μMのアセトシリンゴン含有MS培地で、菌濃度（OD600）0.01前後に調整するのがよい（表2）。接種後、3日間、22℃暗黒下で茎片を共存培養させる。
   
3. 共存培養後は、アグロバクテリウムをクラフォランで除菌した後、遺伝子導入細胞のみから不定芽原基を誘導するのには、ハイグロマイシン50mg/lの添加が適当である（表3）。
   
4. 不定芽原基は、抗生物質を含まない培地に移植し、再分化させる。
   
5. この方法によりTSWVのN遺伝子導入個体が得られる（図1）。
   

成果の活用面・留意点

1. 用いた材料は茎片であるが、遺伝子導入条件が他の組織に全て適用できるとは限らない。また、茎片でも部位により遺伝子導入効率が異なるので、注意が必要である。
   
2. 今後は、遺伝子導入個体のTSWV抵抗性検定と導入遺伝子の発現状況を調査する。
   

• カテゴリ: 病害虫 きく 抵抗性 抵抗性検定 品種 防除 りんご