DMI剤耐性キュウリうどんこ病菌の遺伝子診断法

• 担当機関: 神奈川農技セ
• 研究期間: 2004～2007
• 研究担当者: 久保深雪; 植草秀敏; 折原紀子; 武田敏幸（全農）; 北宜裕; 野村研
• 発行年度: 2007
• 要約: DMI剤耐性キュウリうどんこ病菌のCYP51遺伝子（ステロール脱メチル化酵素遺伝子）には特異的な塩基置換変異があり、この変異を利用して設計したプライマーを用いれば、高度耐性菌をPCR法により検出できる。
• キーワード: キュウリうどんこ病、DMI剤耐性菌、遺伝子診断法、CYP51遺伝子
• 背景・ねらい: 近年、キュウリ栽培においてDMI薬剤耐性のうどんこ病菌が出現し、防除効果が低下している。有効な防除を行うため、耐性菌発生状況を把握する必要があるが、絶対寄生菌であるため、薬剤耐性試験は繁雑で時間を要する。そこで、DMI剤の標的酵素であるCYP51遺伝子の薬剤耐性程度による塩基配列の違いを基にPCR法によるDMI剤耐性菌の簡易診断技術を開発する。
• 成果の内容・特徴: １．; DMI剤耐性菌のうち、高度耐性菌にはCYP51遺伝子に4箇所の塩基変異が存在する（表１）。; ２．; 防除の実用場面で問題となるのは、生物検定においてトリフルミゾールに対するRf値が500以上となる4塩基置換変異菌である(表１、２）。; ３．; 4箇所の塩基変異を基に設計したプライマーセット（耐性菌検出用のR1F：AAGTTCTTCGCCTCCACTGCとR2R：CAGCGATGTCTCCCTGCGATAのセット、感受性菌検出用のS2F：TCTTCGCCTCCACGGCCCAATとS2R：CAGCGATGTCTCCCTGCGTCAのセット、増幅産物は350bp）を用れば、高度耐性菌とそれ以外の菌をそれぞれ特異的に検出できる。; ４．; 単一病斑を含む直径5mmのリーフディスクからCTAB法により抽出した全DNAを用いて検定ができる（表３）。
• 成果の活用面・留意点: １．; PCRの条件は、プライマーR1F-R2Rのセットでは、熱変性95℃4分、熱変性95℃30秒→アニーリング65℃30秒→伸長72℃30秒を35サイクル。プライマーS2F-S2Rのセットでは、熱変性95℃4分、熱変性95℃30秒→アニーリング67℃30秒→伸長72℃30秒を35サイクル、とする。; ２．; 本法は4箇所の塩基置換変異菌のみ検出可能であり、感受性型と1箇所の塩基置換変異型の菌は区別できない。; ３．; 同じ圃場で4塩基置換変異菌と1塩基置換変異菌が混在して存在するので、複数の検体を用いて圃場の耐性菌発生状況を検定する（表３）。; ４．; CYP51遺伝子に塩基置換変異のない耐性菌（上流域に挿入配列がある等）は低率で存在するが、いずれもトリフルミゾールに対するRf値は500より低い。
• カテゴリ: 病害虫 うどんこ病 簡易診断 きゅうり 耐性菌 防除 薬剤耐性