効率的な遺伝子組換えシクラメンの作出

• 担当機関: 奈良県農業技術センター
• 研究期間: 2000～2002
• 研究担当者: 浅尾浩史; 都築正男
• 発行年度: 2002
• 要約: アグロバクテリウム法を用いて、シクラメン9品種の黄化葉柄から遺伝子組換え個体が作出できる。GUS遺伝子を導入した再分化個体の各組織においてGUS活性が認められ、この技術は広くシクラメン品種へ適用できる。
• キーワード: シクラメン、遺伝子組換えGUS遺伝子
• 背景・ねらい: 従来の交配によるシクラメンの育種において、耐暑性や耐病性などの付与には限界があり、これを改善する上で、遺伝子組換え技術は有効である。しかし、これまでにシクラメンの遺伝子組換えの成功例は少なく、遺伝子の導入に成功した品種も限定されている。そこで、アグロバクテリウム法によって、多数のシクラメン品種において遺伝子組換え個体を作出する。
• 成果の内容・特徴: 1.; 導入には、CaMV35S-GUS遺伝子を組み込んだバイナリーベクター(pBI101HmB)を持つアグロバクテリウムを用いる。シクラメン9品種を無菌播種し，20℃暗黒下で生育させる。１～３ヶ月間生育させた黄化葉柄を1cm長に切断して外植片とする。チジアズロン（TDZ）0.1 mg/l～1.0mg/l、2,4-D 0.1 mg/l～1.0mg/l及びアセトシリンゴン100μMを添加した1/2MS培地（0.2％ゲルライト，3％ショ糖, pH5.8）で7日間前培養した後、アグロバクテリウムを接種し，同じ培地で5日間共存培養する。その後、カルベニシリン 200 mg/l とハイグロマイシン 5 mg/l を添加した培地へ移植する。; 2.; 全ての品種において、TDZ 0.5 mg/l と2,4-D 0.1 mg/lを添加した培地で多数の不定芽形成が認められ（図１）、供試材料の中では「ドレスデン系ブリジット」が最も多くの不定芽を形成する。（表1）。; 3.; 再分化した個体の葉切片におけるGUS活性を組織化学的に調査したところ、各品種とも80％以上の個体でGUS活性が見られ、GUS遺伝子の導入が確認でき（表2）、これは安定した組換え技術である。
• 成果の活用面・留意点: 1.; 表2に示した9品種において遺伝子組換え体を作出でき、この技術は他のシクラメン品種に応用できる。; 2.; 有用遺伝子の導入により、実用性の高い個体の作出が期待できる。
• カテゴリ: 育種 シクラメン 耐暑性 播種 品種 りんご