初期胚由来のクローン牛の4つ子生産

• 担当機関: 宮崎県畜産試験場
• 研究期間: 1998～1999
• 研究担当者: 溝辺敬美; 須崎哲也; 赤塚裕人
• 発行年度: 1998
• 要約: 黒毛和種雌牛から回収した、受精後5日目の16-32細胞期胚をドナー細胞に用い核移植を行い、クローン胚を作出し、発情周期を同期化した受胚牛に新鮮胚で1胚移植し、4つ子1組を含む6頭の核移植産子を生産した。宮崎県畜産試験場・育種部・生命工学科
• 背景・ねらい: 同一遺伝子を有するクローン牛を多数生産することは、牛の改良増殖において有効であると考えられる。しかし、クローン産子の相似性、正常性についてはまだ不明な点が多い。そこで、初期胚をドナー細胞に用い核移植を行い、クローン牛の生産を試みた。

成果の内容・特徴

1. ドナー細胞は黒毛和種雌牛に過剰排卵処理を施し、受精後5日目に回収した16-32細胞期胚を用いた。
2. レシピエント卵子は食肉センター由来の雌牛卵巣から卵子-卵丘細胞複合体を採取、10%FCS加TCM-199で22時間成熟培養後除核し、Ca・イオノフォア（10μM/ml）とピューロマイシン(100μg/ml)で活性化した。
3. ドナー細胞を挿入したレシピエント卵子を、ZFM液を満たした1mm幅のプラチナチャンバーの間に置き、交流8.0V/5sec1回、直流65V/50μsec2回の条件で融合を行った。
4. 体外培養は細胞融合後48時間はCR1aa-BSA(3mg/ml)で、その後10%FCS加CR1aaでマウス胎子繊維芽細胞と核移植後8日目まで共培養した（摂氏8.5度、5%CO_２inair）。
5. 核移植の成績は融合卵率89.8%、分割率85.8%、胚盤胞発生率31.3%であり、1胚当たりのクローン胚数は6.6個であった（表1）。
6. 胚移植成績は受胎率23.3%で4つ子1組を含む核移植産子6頭が分娩した。また妊娠128日で1頭が流産した（表2）。
7. 4つ子のクローン産子は黒毛和種牛の雌で、生時体重は（1）31.0kg（2）29.5kg（3）30.0kg（4）38.0kgで妊娠期間は（1）284日（2）286日（3）289日（4）289日であった（表3）。

成果の活用面・留意点

1. クローン産子の相似性、正常性の調査に活用できる。
2. クローン産子を肥育することにより、増体、産肉能力を調べることができる。
3. 産子の生時体重がまれに重くなることがある。

• カテゴリ: 育種