腫瘍壊死因子欠損マウスの作出

• 研究期間: 1991～1993
• 研究担当者: 関川賢二; 後藤さおり; 今村憲吉; 山本理恵; 谷口隆秀; 百渓英一．松原悠子; 福田勝洋
• 発行年度: 1993
• 要約: 遺伝子ターゲット法を用いTNFα遺伝子欠損マウスの作出を行った。本マウスはTNFαの機能解析や家畜感染症の生体防御機構解明に有効に利用出来る。
• 背景・ねらい: 腫瘍壊死因子TNFαは，遊走細胞の一種である活性化したマクロファ; ージから分泌されるサイトカイン（ホルモン様生理活性物質）で，種々; の感染症において感染防御能を示し，また，細菌の内毒素によるエンド; トキシンショックや細菌感染による敗血症にも関与している。免疫系に; おいてもTNFαはリンパ球の増殖・分化の重要な情報伝達物質として; 働き，その作用は多岐にわたっている。近年，マウス胚性幹（ES）細; 胞を用いた相同組換えによる遺伝子ターゲット法は遺伝子の機能解析を; 行ううえで一般的な方法になってきている。そこで個体レベルでのTNFα; の機能解析を行うことを目的として遺伝子ターゲット法によるTNFα; 遺伝子欠損マウスの作出を行った。

成果の内容・特徴

1. TNFα遺伝子の第３及び第４エキソンの一部を削除し，外来遺伝
   子が挿入された指標としてネオマイシン耐性遺伝子（Neo），ランダ
   ムな遺伝子挿入細胞を除くために５’端側にジフテリア毒素Ａ断片遺伝
   子を組み込んだ遺伝子ターゲッティングベクター（Bluescript）
   を構築した。（図１）
2. ターゲッティングベクターをES細胞に導入し，ES細胞の内在性
   遺伝子との相同組換えにより得られたTNFα遺伝子の欠損したネオマ
   イシン耐性のES細胞のクローンを単離した。
   
3. このES細胞クローンをマフ７ス胚盤胞に注入し，体の各組織がE
   S細胞と宿主胚の両方で構成されたキメラマウスを得た。
   
4. キメラマウスを互に交配してTNFα欠損へテロ接合体及びホモ接
   合体マウスを得た。
   
5. TNFα欠損ホモ接合体マウスは正常マウスにおける致死量のエン
   ドトキシンを投与しても生存することができた。
   （図２）

• 成果の活用面・留意点: TNFα欠損マウスの作出により個体レベルのTNFαの機能解析が可; 能になった。家畜の病原微生物に対する感染防御におけるTNFαの役; 割を解明し，さらに，このサイトカインによる治療法の可能性が考えら; れた。; 研究課題名：欠損変異を導入した遺伝的疾患モデルの作出，MHCクラス; III領域の解析; 予算区分 ：ハイテク（動物DNA），経常; 研究期間 ：平成３年度～平成５年度; 研究担当者：山本理恵・谷口隆秀・百渓英一．松原悠子・今村憲吉・; 後藤さおり・福田勝洋・関川賢二; 発表論文等：腫瘍壊死因子（TNFα）欠損マウスの作出とその解析，; 第１６回日本分子生物学会年会講演要旨p.1281(1993).
• カテゴリ: 治療法