豚水胞病ウイルスの第１中和抗原部位の人為変異許容領域

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1996～1996
• 発行年度: 1996
• 要約: 豚水胞病ウイルスの第１中和抗原部位近傍の構造を部位特異変異導入法並びにコンピューターモデリングにより解析したところ，リジン；アミノ酸番号８０（Ｋ－８０）からアラニン；アミノ酸番号９０（Ａ－９０）の領域が変異導入可能な，自由度の高い領域であることが判明した。
• 要約(英語): Three dimensional structure of neutralization epitope site1 of swine vesicular disease virus (SVDV) was analyzed by site-directed mutagenesis and 3D-modeling. By a mutagenic study, the region from K80 to A90 accepted the insertion or substitution of amino acids and the progeny virus was recovered by transfecion. By the 3D-modeling, this region was predicted as an entity which formed a free loop and protruded from the virus particle (Exotic Disease Research Division, Lab. of Physicochemistry TEL [phone])
• 背景・ねらい: 豚水胞病ウイルス（ＳＶＤＶ）をベクターとした口蹄疫組換えワクチンの開発を目的とし，中和抗原領域が外来組換え抗原の抗原性提示に最も効果的と考え，いくつかの中和抗原部位を明らかにしてきた(J.Gen.Virol. 76, 3099-3106 1995)。; 今回，これら中和抗原部位について外来抗原組換え可能領域を明らかとするため，得られた中和抗原部位の１つである第１中和抗原部位についてミュータジェネシス法並びにコンピューターモデリングを用い人為的に変異を加えてもウイルス複製に影響を及ぼさない領域（人為変異許容領域）を解析した。

成果の内容・特徴

1. 第１中和抗原部位近傍(サイト１）に対して部位特異変異導入法によりアミノ酸を付加し，プロリンに続きセリン２残基まで挿入しても感染性ウイルス粒子の発現に影響を受けない領域；Ｋ－８０～Ａ－９０を認めた（図１）。
   
2. プロリン１残基を挿入した変異ウイルス（Ｎｏ．４－Ｎｏ．９：図１）はいずれも中和モノクローナル抗体と反応しないことから，領域；Ｋ－８０～Ａ－９０は，第１中和抗原領域に含まれることが示唆された。
   
3. コクサッキーウイルスＢ（ＣＢ）の３次元構造情報を元に，ＳＶＤＶのサイト１の３次元構造を予測したところ，この部位が独立したループ構造を作り，各アミノ酸がループの外側に向かって配置されていることが予想された（図２，図３）。このことは，外来のアミノ酸を挿入してもウイルス粒子形成には影響しなかった実験結果とよく一致していた。
   
4. この領域をアミノ酸置換を伴う制限酵素認識配列に置換しても感染性ウイルス粒子の発現に影響は認められず，人為変異許容度が高い領域であることが明らかとなった。（図４）。
   　以上より，領域；Ｋ－８０～Ａ－９０は第１中和抗原領域に含まれる人為変異許容領域であり，外来抗原との組換えに適した領域であると考えられた。
   

成果の活用面・留意点

　ＳＶＤＶのサイト１；Ｋ－８０～Ａ－９０は人為変異許容領域であり，第１中和抗原領域に含まれることから，今後はＦＭＤＶ等の他のウイルスの中和抗原部位のアミノ酸配列との置換を検討していく予定である。

• カテゴリ: ICT 豚