牛乳腺組織のストレス蛋白質（ｈｓｐ９０）の測定とその含量

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1996～1998
• 発行年度: 1996
• 要約: 牛乳腺組織より９０ｋＤａストレス蛋白質（ｈｓｐ９０）を精製し，それに対する特異抗血清を作出した。免疫ブロット法により，様々な泌乳ステージの乳腺組織のｈｓｐ９０含量を測定し，ｈｓｐ９０は牛において乳腺分化関連蛋白質であることを示した。
• 要約(英語): 90-kDa heat shock protein (hsp90) was purified from the mammary tissue of a Holstein cow in late lactation. Contents of the hsp90 in mammary tissues from Holstein heifers and cows in lactating and involut periods were measured by quantitative immunoblotting, using rabbit antiserum raised against purified hsp90. The contents of hsp90 were higher in tissues from lactating cows than in those from heifers and involutin cows. The elevated concentrations of mammary hsp90 in lactation suggest that this protein is involved in lactation. (Hokkaido Research Station, Lab. of Clinical Biochemistry TEL [phone])
• 背景・ねらい: 乳房炎の治癒・悪化の転機および潜在性乳房炎による乳量及び乳質の低下には，免疫機構の働きの良否とともに，血液・乳関門の機能的・物理的損傷が関与していると考えられている。いっぽう細胞障害刺激に対して産生される，ストレス蛋白質と呼ばれる一群の蛋白質が知られている。今回はそのなかの主要な一つ，９０ｋＤａストレス蛋白質（ｈｓｐ９０）の乳腺機能あるいは炎症との関連性やその特性を知る端緒として，ｈｓｐ９０を牛乳腺組織より精製し，それに対する特異抗血清を用いた免疫ブロット法で妊娠前，泌乳，乾乳期の正常乳腺，および乾乳期乳房炎組織中のｈｓｐ９０含量を測定した。

成果の内容・特徴

1. マウス抗ヒトｈｓｐ９０モノクローナル抗体との交差反応を利用した免疫ブロッティングでモニターしながら，硫安分画，各種クロマトグラフィーおよび調整用ＳＤＳ－ＰＡＧＥを経て，乳腺組織よりｈｓｐ９０を精製した（表１、図１）。
   
2. 精製されたｈｓｐ９０をウサギに免疫し特異抗血清を得た（図１）。またこの抗血清を用いた免疫ブロッティングにおいて，基質の発色をデンシトメーターで測ることにより，ｈｓｐ９０の定量を行った。
   
3. 免疫ブロット法で妊娠前（処女），泌乳，乾乳期の正常乳腺組織および乾乳期乳房炎組織（黄色ブドウ球菌に起因）から得た細胞質画分のｈｓｐ９０含量を測定した。結果として，正常組織では泌乳期において明らかにその濃度は高く，ｈｓｐ９０は乳腺の発育や泌乳機能に関連していると考えられた（図２）。また，乾乳期の乳房炎組織は，同じ泌乳ステージの正常組織に比べｈｓｐ９０の含有量が高い傾向もみられ，ｈｓｐ９０は炎症関連蛋白質である可能性も示唆された（図２）。
   

成果の活用面・留意点

　乳腺組織の機能的成熟に対する障害と炎症反応や微生物との関わりは不明な点が多い。ストレス蛋白質群の，乳腺における動態や機能を知ることは，乳房炎における炎症反応と泌乳機能との関係を詳細に知るために有用と思われる。