環境材料よりのListeria monocytogenes選択分離法

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1997～1998
• 発行年度: 1997
• 要約: ２段階増菌後パルカムサプリメント加血液重層寒天培地にて分離培養することにより，リステリア属菌が存在する可能性のある環境材料からListeria monocytogenesを効率よく分離することが可能であった。
• 要約(英語): Listeria monocytogenes was effectively isolated from the environments contaminated with other faster-growth Listeria spp, using the two step selective enrichment method and blood layer agar with PALSAM supplement. (Lab. of Clinical Microbiology, Hokkaido Research Station, TEL [phone])
• 背景・ねらい: 家畜に脳炎，敗血症，死流産を引き起こし、人には致死率の高い感染症を起こすListeria monocytogenes（以下ＬＭ）の環境材料からの分離は，1960年にGrayらによるサイレージからの分離報告以降多くの報告がある。しかし，畜産環境における本菌の生態には不明な点が多い。そこで，ＬＭの生態を解明する第一歩として，同菌の効率的分離法を検討した。

成果の内容・特徴

1. ［基礎的検討］増菌培地としてFDA処方リステリア選択増菌培地（FDA），UVM処方リ
   ステリア選択増菌培地（UVM），緩衝リステリア増菌ブイヨン（BLEB）及びフレイザー培地（F）を，分離培地としてOxford処方リステリア選択培地，パルカム培地（パルカム），血液寒天培地（血寒）及び血液重層寒天培地（血重）を比較した（血寒及び血重以外はオクソイド社製を用いた）。まず，ＬＭ（ML-2株）を接種したサイレージを用いて検討を行った。その結果，増菌法としてはUVM-1あるいはBLEB培地に接種して30℃１日培養後，フレーザー培地に移植して35℃１日培養する２段階増菌法が１段階増菌法よりも優れていた。また，分離培地の選択効果はパルカムがもっとも優れていた。
   
2. ［環境材料を用いた検討］この結果を基に，ＬＭによる牛の流産が発生した農家の
   環境材料を用いて検討を行なった。ＬＭ以外のリステリア属菌種が混在している環境材料のＬＭの陽性率は，パルカム及び血重はそれぞれ２／15及び３／13と低値を示した。そこで選択性に優れ，かつ溶血を指標に釣菌できることを目的に，パルカムサプリメント加血液重層寒天培地（パ血重）（図１，２）を試作した。その結果，パ血重の使用により分離率は13／15と飛躍的に向上した。
   
3. 以上の成績より，リステリア属菌が存在する可能性のある環境材料を，BLEB-FあるいはUVM-Fの２段階増菌後パ血重にて分離培養することにより（図３），ＬＭが効率的よく検出されることが明らかになった
   

成果の活用面・留意点

1. 釣菌コロニーは溶血及びパルカム培地等でのエスクリン分解能を指標として再クローニングすること事が望ましい。
   
2. ＬＭの最終同定は生化学的性状検査等に基づいて行う。
   
3. パルカムサプリメントはオキソイド社製及び同等品を用いる。
   

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