豚インターロイキン２（ＩＬ−２）受容体α鎖遺伝子の単離

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1997～2002
• 発行年度: 1997
• 要約: 豚ＩＬ－２受容体α鎖のｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを単離し，当該分子の一次構造ならびにゲノム構造を解明した。また本遺伝子が８つのエクソンから構成され，第１０染色体長腕上に存在することが明らかとなった。
• 要約(英語): cDNA and genomic DNA encoding porcine interleukin-2 receptor alpha(IL-2Ra) gene were cloned, and the nucleotide sequences were analyzed. The reactivity of the protein encoded by the cDNA sequence with porcine IL-2Ra specific antibody, 231-3B2, was confirmed by using COS expression system. It was demonstrated that porcine IL-2Ra gene was composed of eight exons in the genomic sequence and assigned to the long arm of chromosome 10. (Lab. of Bioengineering, Department of Biological Product, TEL [phone])
• 背景・ねらい: 免疫応答の中枢であるＴ細胞は，細胞膜上に存在する抗原受容体を介した刺激により活性化され，Ｔ細胞増殖因子であるインターロイキン２（ＩＬ－２）をはじめ種々の分子の発現，分泌を行う。ＩＬ－２受容体を構成するα鎖分子もＴ細胞の活性化にともなって発現されるタンパク質で，恒常的に発現するβおよびγ鎖と会合してヘテロ三量体型のＩＬ－２受容体を形成する。ＩＬ－２に対し高親和性を有するヘテロ三量体型受容体の発現によって，抗原刺激に応答したＴ細胞群のＩＬ－２感受性が著しく亢進し，増殖分化が誘導される。本分子の発現は，抗原刺激ならびに共存するサイトカインに依存した制御を受けており，この制御機構の解析によって免疫応答を司るＴ細胞の活性化機序の一端が解明されると考えられる。そこで，家畜におけるＩＬ－２受容体α鎖分子発現調節機構を解析する端緒として，当該遺伝子の単離を試みた。

成果の内容・特徴

1. コンカナバリンＡで刺激した豚の末梢血単核球のｍＲＮＡよりｃＤＮＡライブラリーを作製した。これをマウスのＩＬ－２受容体α鎖遺伝子をプローブに用いたプラークハイブリダイゼーション法に供して，豚ホモローグのｃＤＮＡクローンを単離した。（Genbank U78317）
   
2. ＣＯＳ細胞を用いて豚のＩＬ－２受容体α鎖を発現させ，本分子に特異性を有すると考えられているモノクローナル抗体２３１－３Ｂ２を用いて免疫染色を実施した（図１）。この結果，２３１－３Ｂ２抗体の特異性が分子レベルで確認された。
   
3. 豚のＩＬ－２受容体α鎖のゲノムＤＮＡを単離し，イントロン１を除く全塩基配列を解析し，ゲノム構造を明らかにした（図２）。（Genbank AF036005及びAF052037）
   
4. 豚ＩＬ－２受容体α鎖のゲノムＤＮＡをプローブに用いたＦＩＳＨ法による遺伝子マッピングの結果，本遺伝子が第１０染色体長腕の末端近傍にマッピングされた。
   

成果の活用面・留意点

　 今後は本研究によって単離された遺伝子を利用して，豚ＩＬ－２受容体α鎖の発現調節機構について細胞レベルならびに分子レベルでの解析を行う。

• カテゴリ: 病害虫 豚