日本で分離された口蹄疫ウイルスの性状解析

• 担当機関: （現
• 発行年度: 2000
• 要約: 2000年３月に口蹄疫(FMD）が発生した。感染が疑われた黒毛和牛からOタイプFMDウイルス(O/JPN/2000)を分離した。そのVP1遺伝子の一部領域の系統樹解析の結果から本ウイルスがPanAsia Topotypeに属することが判明した。
• 要約(英語): In Japan four cases of Foot-and-Mouth disease (FMD) occurred from March to May 2000. The FMD virus (FMDV) was isolated from two probang samples of Japanese black cattle in the third case in Miyazaki prefecture. These Japanese black cattle showed clinical signs of salivation, erosion, ulcers in the mouth and nose without forming any vesicular. In order to isolate the virus, the probang samples were inoculated to bovine kidney cells (BK) and bovine thyroid cells (BTh). CPE was observed in the primary BK cells two days after post-inoculation. Specific amplified DNA segments for FMDV were detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) from the virus culture fluid. The virus was identified as FMDV type O by ELISA for antigen detection. The nucleotide sequence encoding VP1 was also determined. It shows that the sequence was the same as that of the formally detected PCR product in the first case, in which the virus could not be isolated. It was shown that this FMDV is one of the strains which is wide-spread in Asia and this virus strain was named O/JPN/2000 by the Pirbright Institute in England, the World Reference Laboratory for FMD. (Diagnosis Section, Department of Exotic Diseases TEL;81-42-321-1441)
• 背景・ねらい: 2000年３月に我が国において92年ぶりに口蹄疫が発生した。初発農家の黒毛和牛においては，RT-PCR法以外では陽性結果は得られず，臨床症状も典型的な口蹄疫と異なっていた。今回発生した口蹄疫の浸潤・伝搬の様相を明らかにするために口蹄疫ウイルスを分離し，そのVP1遺伝子領域の系統樹解析を行う必要があった。

成果の内容・特徴

1. 第３例目の発生農家の黒毛和牛のプロバング材料を，2000RPM10分間，低温で遠心した。沈渣を除去後，0.45µmのフィルターでろ過し，牛甲状腺初代培養細胞(BThy)，牛腎臓初代培養細胞（BK），ハムスター腎臓株化細胞（BHK），豚腎臓株化細胞（IBRS-2）に接種した。ウイルス接種２日後に牛腎臓培養細胞において微弱な細胞変性効果が認められた。（図１）
   
2. 細胞変性効果の認められた培養上清からRT-PCR法で口蹄疫ウイルス特有の遺伝子の増幅が確認された（図２）。さらに，抗原検出ELISAではOタイプに陽性の反応が認められた（図３）。以上のことより分離ウイルスが口蹄疫ウイルスOタイプであることが確認された。
   
3. 分離された口蹄疫ウイルスのVP1を認識する塩基番号469～639位までの遺伝子領域の塩基配列を決定した。既知の同タイプの口蹄疫ウイルスとの比較のため解析データを英国口蹄疫ワールドリファレンス研究所に送り，系統樹解析を実施したところ（図４），日本で分離された口蹄疫ウイルスは近年アジア地域で広く流行しているPanAsiatopotypeに属することが判明した。
   
4. 口蹄疫ワールドリファレンス研究所は日本政府と協議し，本ウイルスをO/JPN/2000と命名した。
   

成果の活用面・留意点

　口蹄疫ウイルスが今回分離されたことから，その原因究明，国内における浸潤状況の調査，さらには防圧体制の構築に極めて有効な技術的情報となった。非定型的な口蹄疫をもたらした本病原体が分離された意義は大きい。

• カテゴリ: 肉牛 豚