ＰＥＧ法によるイネへの巨大ＤＮＡ導入技術の開発

• 担当機関: 農業生物資源研究所
• 研究期間: 1996～1996
• 発行年度: 1996
• 要約: コスミド（50kb程度）、ＰＡＣ（100-200kb）レベルの巨大ＤＮＡはＰＥＧによるコトランスフォーメーション法でイネへ導入できることを明らかにした。ハイグロマイシン抵抗性カルスの約20-30％で巨大ＤＮＡの導入が確認できた。また、後代へも安定して遺伝することを明らかにした。
• 背景・ねらい: ゲノム由来の巨大ＤＮＡ導入技術は、近年、遺伝子解析技術の一つの手法として; 強く切望されている。特に近年、ＢＡＣ、ＰＡＣ、やＹＡＣという巨大ＤＮＡ用; のベクター開発が急速に進展しマップベースのＤＮＡ解析が現実的なものとなっ; た。100kb以上のＤＮＡが効率的にイネに導入可能になれば、マップベースの遺伝; 子解析に形質転換技術を用いることが可能となり、遺伝子解析が急速に進展する; と考えられる。このような巨大ＤＮＡ導入技術を開発する事を目的とする。; エレクトロポレーション、ＰＥＧ法など各種形質転換法を用いコスミド、ＰＡＣ; などに組み込まれた50-100kbのヒトＤＮＡ鎖をイネへ導入することを試み、パル; スフィールド電気泳動を行い、ヒト巨大ＤＮＡが効率的にまた連続して導入でき; るかを検討した。

成果の内容・特徴

1. ヒトの50kbのＤＮＡを組み込んだコスミドをハイグロマイシン抵抗性遺伝子をマーカーとしてＰＥＧ法を用いイネ形質転換を行った場合、平均して再分化植物の約30％にヒトＤＮＡの全長部分を連続的に導入できることを明らかにした。
   
2. ヒトの100kbのＤＮＡを組み込んだＰＡＣ遺伝子（100ug/ml）をハイグロマイシン抵抗性遺伝子（10ug/ml）と混合したＰＥＧ法を用い形質転換を行うと、得られたハイグロマイシン抵抗性植物の約20％でヒトの100kbのＤＮＡ鎖の60kb部分が完全な形で導入されており，ＰＥＧ法で効率的に巨大ＤＮＡを導入できることを明らかにした。
   
3. コスミド、及びＰＡＣを導入した形質転換体の後代よりゲノミックＤＮＡを抽出したゲノミックサザンハイブリダイゼーションを行った結果、導入した遺伝子は後代に安定して遺伝することを明らかにした。
   

表１図１図２図３

• 成果の活用面・留意点: ＰＥＧ法による形質転換法でイネに巨大ＤＮＡを効率的に導入できることが明ら; かとなったが、今後はこの技術を用いることにより効率的にマップベースの遺伝; 子の機能解析を行うことができると考えられる。
• カテゴリ: 抵抗性 抵抗性遺伝子