ダイズBACライブラリーを用いた簡便な遺伝子の単離法

• 担当機関: （独）農業・生物系特定産業技術研究機構 北海道農業研究センター
• 研究期間: 2002～2004
• 研究担当者: 石本政男; 山本直樹（東北大院理学）; 柴田大輔（かずさDNA研）
• 発行年度: 2004
• 要約: ダイズゲノムの5.9倍に相当する２種類のBACライブラリーとスクリーニング用三次元プールを構築した。スクリーニング用三次元プールを用いることにより、目的とする遺伝子配列を含むBACクローンをPCRによって迅速かつ簡便に単離することができる。
• キーワード: ダイズ（「ミスズダイズ」）、連鎖地図、BAC、TAC、遺伝子単離
• 背景・ねらい: ダイズにおいてSSRマーカーやRFLPマーカーなど多数の分子マーカーが開発されているが、その多くは特定の品種、系統間でなければ多型を示さない。しかし、ゲノム上には塩基配列の挿入や欠失、一塩基多型（SNPs）などの未利用の多型が数多く存在する。そこで、分子マーカーや特定遺伝子を含む領域のゲノム構造を解析するため、ダイズ連鎖地図の作製に用いられている品種「ミスズダイズ」から巨大ゲノム断片を調製し、BAC（バクテリア人工染色体, Bacterial artificial chromosome）ライブラリーを構築する。さらに、分子マーカーや特定遺伝子を含むBACクローンを迅速かつ簡便に単離するシステムを開発する。
• 成果の内容・特徴: 1.; BACライブラリー（HindIII）の総計は約2.9Gb、BACライブラリー（Bgl II）の総計は約3.8Gbであり、合計でダイズゲノムDNAの5.9倍に相当する（図１）。
• 成果の活用面・留意点: 1.; BACライブラリーの構築にはTAC(pYLTAC7)ベクターを用いたので、アグロバクテリウム法によって挿入断片を導入することが可能である。; 2.; BACライブラリーは２種類の異なる制限酵素による部分消化によって構築したが、まれにライブラリーに含まれないゲノム領域が存在する可能性がある。; 3.; これらBACライブラリーの使用については、問い合わせにより対応する。
• カテゴリ: 大豆 品種