カイコのゲノムからのDNA多型を示すクローンのスクリーニング法

• 担当機関: 蚕糸・昆虫農業技術研究所
• 研究期間: 1992～1993
• 研究担当者: 行弘研司; 安河内祐二; 神田俊男; 田村俊樹
• 発行年度: 1993
• 要約: RFLP検出用のプローブを単離するためカイコの支108号系統由来のゲノムDNAライブラリーを作出した。このライブラリーのスクリーニング法が確立され、RFLPを検出できるクローンの単離効率が明らかにされた。
• キーワード: RFLP検出用のプローブを単離、クローンの単離効率
• 背景・ねらい: イネ、トマト等で作物としての品質に関与する遺伝子が同定され、効率的育種法の開発を目指してRFLP連鎖地図の構築が進んでいる。これらはいわゆるゲノム研究の一端を担うものである。昆虫ではキイロショウジョウバエでゲノム研究が進んでいるが、有用昆虫である蜜蜂やカイコではまだ緒についてばかりである。しかし、有用昆虫としてカイコの利用を促進するにはRFLP連鎖地図による有用遺伝子のマッピングが重要である。そのためにはカイコゲノムDNAライブラリーよりDNA多型を示すクローンの単離効率を検討し、スクリーニング法を確立することが重要である。

成果の内容・特徴

1. 支108号系統のゲノムDNAを制限酵素Pst1で切断して得られた0.5-2.0kbの断片よりゲノムDNAライブラリーを作出した。
2. ³²Pでラベルされた全ゲノムDNAをプローブとした2段階のハイブリダイゼーションによりゲノム中での反復度の低いクローンの選択法を確立した。
3. 2.で確立された選択法を用いて、861クロンをスクリーニングした結果、151が反復度が低いと判明した。この中の109クローンを調べたところ60がシングルコピーであり、その中の45でDNA多型を検出できた。
4. 作出したライブラリー全体を考えると約90%クローンが反復配列を含み、約10%がシングルコピーであり、そのうちの75%はRFLPを検出できるプローブとして使用できることが明らかとなった(図1)。

• 成果の活用面・留意点: カイコのゲノムDNAライブラリーからのRFLP検出用プローブの単離効率が決められた。この方法と他の手法を組み合わせることにより、高密度のRFLP連鎖地図の作出が可能となる。
• カテゴリ: 育種 カイコ トマト