品種識別のためのDNAの簡易、迅速、安価、多検体抽出法

• 担当機関: （独）農業・生物系特定産業技術研究機構 野菜茶業研究所
• 研究期間: 2002～2004
• 研究担当者: 松元 哲; 吹野伸子; 藤村みゆき; 國久美由紀
• 発行年度: 2004
• 要約: イチゴ等の野菜、緑茶、冷凍エダマメからグラスファイバーを装着した96ウェルプレートを用いて3時間以内に192検体のDNAが安価に抽出できる。抽出したDNAは品種識別に使用可能である。
• キーワード: イチゴ、緑茶、DNA抽出、品種識別、グラスファイバー
• 背景・ねらい: 育成者権の保護や偽装表示防止のために、DNAマーカーを用いた品種識別技術が実用化されているが、DNAの抽出については簡易、迅速、安価で多検体の処理が求められている。特にイチゴの葉、ガク、果実のように多糖類が多く含まれている場合、CTAB法など汎用されている方法ではDNA抽出が困難であり、抽出操作やコスト面から改善すべき点が多い。そこでDNAを吸着できるグラスファイバーが付いた96ウェルプレートを用いて、DNA抽出の効率化を図る。
• 成果の内容・特徴: 1.; 192（96ウェルプレート2枚分）検体の粉砕からDNA抽出までの所要時間は、3時間以内である（図1、図2）。1検体あたりの抽出に要する試薬コストは約50円であり、市販品の1/5から1/10である。また本抽出法はフェノールやクロロホルムを使用しない。 ; 2. ; 20～40mgのイチゴ成葉、ガクと100mgのイチゴ果肉から、イチゴの成葉では0.7μg、ガク0.4μg、果肉0.1μg程度のDNAが抽出可能である（表１）。また仕上げ加工した緑茶や調理した冷凍エダマメからもDNAが抽出できる（表1）。 ; 3. ; イチゴ成葉、ガク、果肉から本方法により抽出したDNAをPCRの鋳型に用いてイチゴ品種識別用DNAマーカーの増幅が可能である（図3）。
• 成果の活用面・留意点: 1.; DNA抽出量は、試料の状態、量、粉砕の程度によって大きく異なる。; 2.; 80％エタノール洗浄後は、96ウェルプレートのウェル内にエタノールが残存しないようにする。; 3.; 抽出したDNAを長期に保存するときには、エタノール沈殿など再精製を行うことが望ましい。; 4.; 詳細なマニュアルの作成を行い、ホームページ等で公開予定である。
• カテゴリ: いちご えだまめ 加工 コスト 茶 DNAマーカー 品種