シロクローバ茎頂の低温及び超低温保存技術

• 担当機関: 東北農業試験場
• 研究期間: 1985～1989
• 発行年度: 1989

成果の内容・特徴

1. 技術・情報の内容及び特徴
   
   1. 低温保存：
      茎頂組織は低温(4度C)下で、約1年間は安定して保存することが可能である
      (表1)が、それ以上の期間の保存では生存率が
      低下するため、新鮮な培地の添加ないし交換が必要であると考えられた。
      
   2. 超低温保存：
      液体窒素(-196度C)による凍結処理法により、茎頂組織の高い生存率が得られたが、
      この方法は次のようである(図1)。茎頂組織を
      5％DMSO(ジメチルスルフォキシド)及び5％グルコースを加えた培地で2日間、
      4度Cで前培養して、10％DMSO及び10％グルコースを含む凍結媒液中で、0.3度C/分
      の冷却速度で、-40度Cまで予備凍結し、液体窒素に入れ保存した。その後、40度Cの
      温水で急速に融解後、洗浄せずに寒天培地上の濾紙に直接組織を置床した。この
      方法によると、品種の耐寒性に関係なくどの品種においても80％以上の高い生存率が
      得られた(表2)。一方、茎頂組織を液体窒素中で
      10ヶ月間保存したが、生存率の低下はなかった。
      
2. 技術・情報の適用効果
   シロクローバは他殖性植物で遺伝的にヘテロなため、優良な遺伝子型を栄養体で
   保存する必要があり、これまで栄養体を圃場及びポットで保存してきたが、
   モザイク病などの感染により、有用な遺伝子型の消失がしばしばみられた。今回
   開発した保存法は、遺伝資源として栄養体をウイルスフリーの状態で中・長期間
   安定して保存することを可能にすると考えられる。低温保存は、中期的な保存に、
   超低温保存は長期的な遺伝資源の保存に利用される。
   
3. 適用の範囲
   栄養体で遺伝資源を保存する育種研究機関。
   
4. 普及指導上の留意点
   操作全般にわたって、雑菌の混入に注意を払う必要がある。
   

• カテゴリ: 育種 遺伝資源 耐寒性 品種