シロクローバの組織・細胞における簡便な凍結保存法の開発

• 担当機関: 東北農業試験場
• 研究期間: 1988～1990
• 発行年度: 1991

成果の内容・特徴

1. 技術・情報の内容及び特徴
   
   1. 1.2Mソルビトールを含む寒天培地で4度C、2日間前培養した茎頂組織を
      ガラス化液(PVS2:30%グリセリン、15%エチレングリコール、15%DMS0、0.4Mしょ糖、
      B5培地)を用いて25度Cでは5分間、0度Cでは15分間処理して細胞を脱水させて
      から液体窒素に入れガラス化させた場合に80%以上の高い生存率が得られ、また、
      アカクローバやエジプシアンクローバでも約50%の生存率で
      あった(表1、表2)。
      
   2. 前培養した茎頂を3Mグリセリンと0.4Mしょ糖を含むB5培地に入れ、25度Cで10分間処理
      を行なった後、-30度Cのフリーザー内に入れて約1時間細胞を凍結脱水後、液体窒素中
      に入れて保存する簡易凍結保存法でも80%以上の高い生存率が得られた(表3)。
      
   3. メリステマティクカルスは0.6Mソルビトールの含む液体培地で25度C、16時間前培養した
      ときに耐凍性が最も高く、PVS2による最適処理時間は25度Cでは7分間、0度Cでは
      20分間であった。カルスの増殖率は、簡易凍結保存法で最も高く(表4)、簡易凍結保存法がカルス組織の保存法として
      きわめて有効であると考えられた。
      
2. 技術・情報の適用効果
   他殖性マメ科牧草シロクローバの育種資源の圃場での保存は、モザイク病等による
   有用な遺伝子型の損失の危険性が極めて高く、その維持管理に多大の経費と労力
   を必要とした。しかし、簡易凍結保存法を用いることによりコンパクトで大量に、さらに
   安全で、長期に保存が可能となる。
   
3. 適用の範囲
   シロクローバの育種資源の保存に適する。
   
4. 普及指導上の留意点
   液体窒素ボンベを低温室に保存し、液体窒素が不足しないように補充に
   十分注意すること。
   

• カテゴリ: 育種