蛍光消光を用いた新規なプローブによる牛受精卵の遺伝病診断技術の実用化

• 研究機関名: 北海道立畜産試験場
• 研究分担: 畜産工学部遺伝子工学科
• 研究期間: 新H17
• 年度: 2005
• 摘要: 新規な蛍光消光プローブであるQProbeを用いた遺伝子解析技術（QP法）により、牛受精卵における迅速、簡便、安価な遺伝病診断技術を開発する。方法：1)バンド３欠損症を対象として、QProbeおよびPCRプライマーを設計し、少量のゲノムDNAから診断可能な解析条件を検討した。2）J-Bio 21で開発した前処理技術を、受精卵に適用し、少数細胞からの効率的なDNA抽出技術を検討した。抽出後、Qprobeを用いてPCR増幅し、温度解離曲線解析を行って、本処理技術の有効性を確認した。3)複数の受精卵サンプルについて、1）および2）で得られた解析条件にてバンド３欠損症診断を行い、有効性の実証を検討した。成績の概要：1)バンド３の配列情報に基づき、Qprobeおよびプライマーを設計した。これらの中から最も良い結果が得られた組み合わせを選択して、QP法を行ったところ、ワイルドタイプとミュータントを判定することができ、感度については、10pgまで安定した結果が得られた。2)J-Bio 21で開発された前処理液を用いて、牛ゲノム中のチェディアックヒガシ症候群遺伝子をPCR増幅したところ、顕著な蛍光消光を確認した。しかし、受精卵では前処理液の十分な効果が得られず、畜試で常法としているPK＆TW法を適用した。3)新鮮正常胚（１胚あたり細胞数：150-200個）５個を用いて、PK＆TW法によりDNAを抽出し、QP法を行ったところ、各胚の1/20に相当するところまで安定して検出することができた。また、バンド３ヘテロ胚およびホモ胚を含む凍結保存胚27個を用いて、QP法を３回繰り返し検討したところ、全ての胚で結果が一致していた。
• 専門: 家畜衛生
• 部門: 牛
• カテゴリ: 飼育技術 診断技術