アルボウイルス感染症等の亜熱帯地域に多発する疾病の防除法の開発

• 課題番号: 2013023079
• 研究機関名: 農業・食品産業技術総合研究機構
• 研究分担: 鮫島俊哉
• 協力分担関係: 沖縄県家畜衛生試験場; 鹿児島大学共同獣医学部; 総合研究大学院大学; 化学及血清療法研究所
• 研究期間: 2011-2015
• 年度: 2013
• 摘要: 亜熱帯地域に多発する疾病研究に関しては、a) 国内分離流行性出血熱ウイルス（EHDV）8株のRNA分節10について国外分離株との比較解析を行い、イバラキウイルスや豪州分離株と同じグループを構成する4株、流死産を引き起こした平成9年九州分離株、血清型1の3株の3つの グループに分類されることを明らかにし、血清型1のEHDVが国内に分布している可能性を得た。さらに国外で開発されたEHDV検出用リアル タイムRT-PCR法により、イバラキウイルスを含む全9株のPCR検出が可能であることを確認した。b) アカバネウイルス（AKAV）、アイノウ イルス（AINOV）及びピートンウイルス（PEAV）感染ラットの脳を用いて、同ウイルスに対するポリクローナル抗体及びモノクローナル抗 体による免疫組織化学的抗原検出を検討した結果、AINOVとPEAVは識別できなかったが、AKAVは特異的に識別可能であることを明らかにし た。c) AKAVの主たる媒介昆虫であるウシヌカカについて、虫体組織固定とパラフィン包埋手法の改良により切片作製法を確立し、虫体組 織の形態観察及びAKAV抗原の組織内検出を可能とした。AKAV感染赤血球を吸血したウシヌカカでは、免疫組織化学的手法により吸血後10日目までにそ嚢、中腸、後腸、脂肪体、唾液腺においてAKAV抗原の検出を認めた。d) AKAVの沖縄分離株（2012）及び鹿児島分離株（2013） についてM RNA分節の分子系統樹解析を行い、生後感染による牛の脳脊髄炎に関与すると考えられるgenogroupⅠに属することを明らかにした。さらにアミノ酸レベルの解析においても同様の結果を得た。e) 新興アルボウイルスによる骨格筋の消失・脂肪浸潤等の病理発生機序 を解明するために、牛胎児大腿骨格筋から牛胎児骨格筋由来培養細胞を確立した。確立した培養細胞については骨格筋細胞マーカーにより骨格筋の筋芽細胞であることを確認するとともに、AKAV接種試験により免疫組織化学的手法により同細胞内でのAKAVの増殖を確認した。f) 血液の加温によって実験室内人工吸血システムを改良し、吸血ヌカカの安定した作出を可能にした。また、野外ヌカカからディアギュラ ウイルスを分離し、ヌカカからの検出から1か月半以上遅れて牛からも分離できた。さらにCulicoides属ヌカカの幼虫から抽出したミトコ ンドリアDNAから増幅したPCR産物を解析することで、ヌカカの種の迅速同定を可能にし、野外で採集した幼虫を用いて各種ヌカカの生息場所を初めて明らかにした。g) アルボウイルスを媒介するヌカカを効率的に誘引するには近紫外線の波長が有効であることを明らかにし、 近紫外線波長のLEDを用いた約20時間稼働する携帯可能な小型の吸引式ライトトラップを完成させた。野外試験の結果、市販のライトトラ ップと同等以上の捕集能力があることを確認した。h) アルボウイルス及び媒介節足動物の監視・予察技術高度化の一環として、アジア、 オセアニアで採集したウシヌカカの個体群が地域間で遺伝学的な差異を持つことを明らかにした。また、リアルタイムRT-PCRの改良を行い、全てのAKAV国内分離株の検出が可能であることを確認した。
• カテゴリ: 亜熱帯 乳牛 防除 予察技術