プロテインジスルフィドイソメラーゼの精製とその遺伝子のクローニング（７６）

• 課題番号: 1995003715
• 研究機関名: 食品総合研究所（食総研）
• 研究分担: 理化学・蛋白質研
• 研究期間: 完Ｈ０４～Ｈ０６
• 年度: 1995
• 摘要: プロテインジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）は反応速度の遅い蛋白質間のチオールジスルフィド交換を効率よく行う酵素である。よって、この酵素の特性解明は、蛋白質の立体構造形成過程の解析を可能にし、大豆や米中に含まれるアレルゲンのエピトープ解析に資する。ＲＮａｓｅを尿素存在下で変性後、空気酸化させたｓｃｒａｍｂｌｅｄ ＲＮａｓｅを基質として用い、立体構造の再生をＲＮａｓｅの活性の回復を指標としてＰＤＩ活性を測定した。発芽２～３日目の大豆摩砕物から硫安分画・ＤＥＡＥ ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ・Ｓｕｐｅｒ Ｑ ＦＦ・ＨｉｌｏａｄＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｐｇ・Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈｒｏｓｅ・Ｇ－３０００ゲル濾過を用いて、ＰＤＩを精製した。そのＮ－末端アミノ酸配列を決定したところ、アルファルファ及び、出芽酵母のＰＤＩと相同性が認められた。またペプチドマッピングとシークエンス決定の結果、ＰＤＩの活性中心と考えられる２つのＷＣＧＨＣＫシークエンスを含むペプチドが得られ、また他のペプチドについても、アルファルファのＰＤＩとの間に高い相同性が認められた。
• カテゴリ: アルファルファ 大豆