豚胸膜肺炎菌のＰＣＲ法による迅速検出とタイピング法の開発（１１７）

• 課題番号: 1997003745
• 研究機関名: 家畜衛生試験場（家衛試）
• 研究分担: 九州細菌寄生虫・病原機能研臨床細菌研
• 研究期間: 継Ｈ０８～Ｈ０９
• 年度: 1997
• 摘要: 本研究では、ＰＣＲ法を用いた豚胸膜肺炎菌（Ａｐｐ）迅速検出法の実用化を目指して、Ａｐｐの外膜リポ蛋白質遺伝子（ｏｍｌＡ）を標的としたＰＣＲ用最適プライマーの構築と、高感度な菌検出を目指した試料調整方法の検討、及び野外材料を用いての実用性評価を目的としている。既に検討中のプライマーを改良した結果、１２血清型全ての参照株より約９７０ｂｐの特異的な断片が増幅されｌｏｗ ｓｔｒｉｎｇｅｎｃｙ な条件下でクローン化された５型ｏｍｌＡプローブにハイブリダイズした。また、Ａｐｐとの鑑別が重要なＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ及びＭｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む２２菌種からは、増幅が無かった。これらＰＣＲの増幅産物を各種制限酵素で切断した結果、ＶｓｐＩによって１２血清型が５つのグループに型別され、その制限酵素消化パターンにより、血清型の差異をある程度特定できるようになった。今後は、これらの技術を用いて、野外材料に応用可能か否かを検討する。
• カテゴリ: 病害虫 診断技術 大豆 豚 防除