53.園芸作物等におけるウイルス病防除技術の開発　（１）ウイルス病の迅速診断技術の確立

• 研究機関名: 秋田県農業試験場
• 研究分担: 生物工学部
• 研究期間: 継H13～17
• 年度: 2003
• 摘要: 目的：キクわい化ウイロイド(CSVd)の検定は遺伝子診断法が有効な手段であるが、現行のnested PCRでは非特異的増幅が生じて紛らわしいことがあるため、より特異性の高いプライマーを設計して、検出精度を高める。方法：CSVd感染キク及び健全キクからEZNA Plant RNA Kitを用いて全RNAを抽出した。プライマーCSVS1/CSVC1とOne Step RNA PCR Kitを用い、RT-PCRを行った。現行のプライマーCSVS3/CSVC3と新たに設計したプライマーCSVS4/CSVC4を用いてnested PCRを行い、結果を比較した。結果：現行のプライマーを用いてnested PCRを行った場合、健全キクで非特異的増幅が起こることがあったが、新たに設計したプライマーCSVS4/CSVC4を用いた場合、健全株でバンドは生じず、感染株でのみ期待されるサイズの断片が生じた。全RNAの希釈段階を作り、2つのプライマーセットの検出限界を調べたところ、両者で差は見られなかった。以上のように、新たに設計したプライマーCSVS4/CSVC4を用いることによって、検出感度を高めることはできなかったが、健全キクにおける非特異的増幅をなくすることができた。
• 研究対象: キク
• 戦略: 園芸
• 専門: 病害
• 部門: 花き
• カテゴリ: 病害虫 きく 診断技術 防除