イチゴ品種間で多型を示すＲＡＰＤプライマーの選抜

• 担当機関: 兵庫県立中央農業技術センター
• 研究期間: 1997～1998
• 研究担当者: 玉木克知; 山元義久; 松本純一
• 発行年度: 1997
• 要約: イチゴ主要品種の「とよのか」と他品種との間で多型を示すRAPD プライマーを選定した。多くの多型バンドが検出されるプライマーや、イチゴでは増幅バンドを検出できないプライマーが認められた。
• 背景・ねらい: DNAマーカー育種を行う際、まず交配親品種間で多型を示すDNAマーカーが必要になる。そこで10塩基のRAPDプライマーを供試し、イチゴ品種間で多型を示すものを選抜する。特に多型バンドを検出しやすいプライマーを調査し、今後の研究のための資料とする。

成果の内容・特徴

1. プライマーは、オペロン社から発売されている10塩基からなる計200種類（OPA-01～OPJ-20）を単独で用いた。
   
2. イチゴ未展開葉からPEG法（M.S.Greenwood et al. 1989）によってDNAを抽出し、それを鋳型としてPCRを行った。PCR反応は、鋳型DNA 2.5ng、dNTPs 200μM、DNA合成酵素（AmpliTaq Gold、パーキンエルマー社）1.25 U、酵素添付の×10バッファー2.5μl、MgCl₂ 2.5μMを加えて、滅菌蒸留水で25μlの反応系に調整した。反応条件は、GeneAmp PCR System 9600（パーキンエルマー社）を用い、95℃ 9分間のプレヒート後、95℃の変性 60秒間、40℃のアニーリング 60秒間、72℃の伸長反応 120秒間を１サイクルとして45サイクル行い、最後に72℃の伸長反応を5分間行った。
   
3. PCR産物は、1.5%アガロースゲル電気泳動法で分離し、「とよのか」と各品種との間で多型バンドを検出した。「とよのか」と「宝交早生」の間で多型バンドが検出されたプライマーについては、再度同じ条件で追試し、再現性を確認した。
   
4. 調査したどの品種についても、100種類以上のプライマーで「とよのか」との間に多型バンドが検出される（表１）。
   
5. プライマーによっては多くの多型バンドが検出されるものがある（表２）。一方、供試したイチゴ品種では増幅バンドが検出されないプライマーもある（表３）。
   

成果の活用面・留意点

1. イチゴ葉にはDNA合成酵素活性を阻害する多糖類が多く含まれると考えられ、DNA抽出に用いる葉の状態等によっては、十分な再現性が得られない場合もある。
   
2. この結果はDNAマーカー選抜の他、品種識別にも応用できる。
   

• カテゴリ: 育種 いちご DNAマーカー 品種